| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 KRAS基因简介 | 第13-16页 |
| 1.1.1 KRAS基因突变概况 | 第13-14页 |
| 1.1.2 KRAS基因突变的靶向治疗 | 第14-16页 |
| 1.2 基因突变常用检测方法 | 第16-20页 |
| 1.2.1 直接测序法 | 第16-18页 |
| 1.2.2 限制性片段长度多态性分析方法(restrictionfragmentlength polymorphism,RFLP) | 第18页 |
| 1.2.3 基因芯片技术 | 第18-19页 |
| 1.2.4 变性高效液相色谱法(denaturinghighperformanceliquid chromatography,DHPLC) | 第19页 |
| 1.2.5 高分辨率熔解曲线分析法(high resolution melting,HRM) | 第19-20页 |
| 1.3 等位基因引物PCR技术及其研究现状 | 第20-22页 |
| 1.3.1 等位基因引物PCR技术简介 | 第20页 |
| 1.3.2 等位基因引物技术的改进 | 第20-22页 |
| 1.3.3 等位基因特异引物PCR技术的应用 | 第22页 |
| 1.4 实时荧光定量PCR技术及其研究现状 | 第22-25页 |
| 1.4.1 实时荧光定量PCR技术简介 | 第22-24页 |
| 1.4.2 实时荧光定量PCR技术的应用 | 第24-25页 |
| 1.5 立题依据和研究内容 | 第25-27页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第25页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第26-27页 |
| 第2章 7种常见结直肠癌KRAS基因突变序列的构建 | 第27-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验菌株与培养基 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 实验仪器与设备 | 第29页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 7种常见KRAS基因突变序列的合成 | 第29-31页 |
| 2.2.2 7种常见KRAS基因突变序列重组载体的连接 | 第31-32页 |
| 2.2.3 大肠杆菌Top10 感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.4 7种常见KRAS基因突变序列的重组载体的转化 | 第33页 |
| 2.2.5 7种常见KRAS基因突变序列的重组载体质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.3 结果与分析 | 第34-39页 |
| 2.3.1 7种常见KRAS基因突变序列的合成结果 | 第34-35页 |
| 2.3.2 7种常见KRAS基因突变序列表达载体的构建结果 | 第35-36页 |
| 2.3.3 测序鉴定结果 | 第36-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第3章 基于等位基因引物和Taqman探针的结直肠癌KRAS基因检测qPCR体系的构建 | 第41-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验样本 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 实验仪器与设备 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1 Taqman探针与7 对等位基因引物的设计 | 第42页 |
| 3.2.2 一对等位基因引物和Taqman探针qPCR检测体系的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.3 多对等位基因引物和Taqman探针qPCR检测体系的构建 | 第43页 |
| 3.3 结果与分析 | 第43-46页 |
| 3.3.1 等位基因引物及Taqman探针序列 | 第43-44页 |
| 3.3.2 一对等位基因引物和Taqman探针qPCR检测结果 | 第44-45页 |
| 3.3.3 多对等位基因引物和Taqman探针qPCR反应结果 | 第45-46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-49页 |
| 第4章 基于等位基因引物和Taqman探针的结直肠癌KRAS基因检测qPCR的分析性能测试 | 第49-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-51页 |
| 4.1.1 实验样本 | 第49-50页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第50页 |
| 4.1.3 实验仪器与设备 | 第50页 |
| 4.1.4 试剂的配置 | 第50-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-55页 |
| 4.2.1 最低检测下限实验 | 第51-53页 |
| 4.2.2 交叉实验 | 第53-55页 |
| 4.2.3 干扰实验 | 第55页 |
| 4.2.4 结果判定 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-62页 |
| 4.3.1 最低检测下限实验结果 | 第56-59页 |
| 4.3.2 交叉实验结果 | 第59-61页 |
| 4.3.3 干扰实验结果 | 第61-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-65页 |
| 第5章 基于等位基因引物和Taqman探针的qPCR法与Sanger测序的方法学比对 | 第65-83页 |
| 5.1 实验材料 | 第65-67页 |
| 5.1.1 实验样本 | 第65-66页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第66页 |
| 5.1.3 实验仪器与设备 | 第66-67页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-70页 |
| 5.2.1 多对等位基因引物和Taqman探针qPCR法临床样本的检测 | 第67-69页 |
| 5.2.2 Sanger测序法的临床样本检测 | 第69页 |
| 5.2.3 多对等位基因引物和Taqman探针qPCR法的重复性 | 第69-70页 |
| 5.3 实验结果 | 第70-82页 |
| 5.3.1 多对等位基因引物和Taqman探针qPCR法临床样本的检测结果 | 第70页 |
| 5.3.2 Sanger测序法的临床样本检测结果 | 第70-80页 |
| 5.3.3 多对等位基因引物和Taqman探针qPCR法的重复性结果 | 第80-82页 |
| 5.4 本章小结 | 第82-83页 |
| 第6章 结论与展望 | 第83-85页 |
| 6.1 结论 | 第83-84页 |
| 6.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第95页 |
