| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| List of Abbreviations | 第13-15页 |
| CHAPTER 1 GENERAL INTRODUCTION AND LITERATURE REVIEW | 第15-49页 |
| 1.1 Background of oriental fruit fly | 第15页 |
| 1.2 Pest control strategies for fruit fly | 第15-18页 |
| 1.2.1 Cultural controls | 第15-16页 |
| 1.2.2 Insecticide cover sprays | 第16页 |
| 1.2.3 Protein bait sprays | 第16页 |
| 1.2.4 Male annihilation technique | 第16-17页 |
| 1.2.5 Release of natural enemies | 第17页 |
| 1.2.6 Sterile insect technique | 第17-18页 |
| 1.3 RNAi-based SIT | 第18-27页 |
| 1.3.1 Types of RNAi | 第22-23页 |
| 1.3.2 Different RNAi pathways and their components | 第23-24页 |
| 1.3.3 RNAi efficiency | 第24-25页 |
| 1.3.4 Systematic properties of ds RNA | 第25页 |
| 1.3.5 Mechanism of transmembrane channel-mediated uptake of ds RNA | 第25-26页 |
| 1.3.6 Mechanism of endocytosis-mediated ds RNA uptake | 第26-27页 |
| 1.4 Role of scavenger receptors in ds RNA uptake | 第27-29页 |
| 1.4.1 Role of endocytic pathways in ds RNA efficiency | 第28页 |
| 1.4.2 Epsin amino-terminal and RSD-3 ortholog | 第28页 |
| 1.4.3 RNA-dependent and RNA polymerase | 第28-29页 |
| 1.5 RNAi in insect pest control | 第29-32页 |
| 1.5.1 Concentration of ds RNA | 第31页 |
| 1.5.2 Nucleotide sequence | 第31页 |
| 1.5.3 Length of the ds RNA fragment | 第31-32页 |
| 1.5.4 Persistence of the silencing effect | 第32页 |
| 1.5.5 Life stage of the target organism | 第32页 |
| 1.6 Role of Nanoparticles in RNAi | 第32-40页 |
| 1.6.1 Chitosan Nanoparticles | 第33-34页 |
| 1.6.2 General characteristics of chitosan functional features Structure, physicochemical properties and source | 第34-36页 |
| 1.6.3 Structure-property relationship | 第36-40页 |
| 1.7 Cell line experiments | 第40-47页 |
| 1.8 Thesis objectives | 第47-49页 |
| CHAPTER 2 The target genes for producing Bactrocera dorsalis sterile males based on RNAi | 第49-77页 |
| 2.1 Introduction | 第49-50页 |
| 2.2 Materials and Methods | 第50-61页 |
| 2.2.1 Insects Rearing | 第50-51页 |
| 2.2.2 The Experimental equipment | 第51页 |
| 2.2.3 Commonly used antibiotics, medium and buffer preparation | 第51-53页 |
| 2.2.4 Strains and plasmids | 第53页 |
| 2.2.5 The main reagents and kits | 第53-54页 |
| 2.2.6 Experimental methods | 第54-61页 |
| 2.3 Results | 第61-72页 |
| 2.3.1 Selection of testes specific genes | 第61-63页 |
| 2.3.2 Total RNA extraction from the B. dorsalis | 第63-64页 |
| 2.3.3 Cloning of selected genes | 第64页 |
| 2.3.4 Gene silence effects using RNAi | 第64-67页 |
| 2.3.5 Screening of target genes for SIT based on male sterility | 第67页 |
| 2.3.6 Effects of solely effect of selected genes on male sterility | 第67-68页 |
| 2.3.7 Effects of combination of different genes on male sterility | 第68-70页 |
| 2.3.8 Technique factors for SIT based on best ds RNA combination | 第70-71页 |
| 2.3.9 Effect of RNAi on Spermatozoa and live/dead sperm of fruit flies | 第71-72页 |
| 2.4 Discussion | 第72-77页 |
| Chapter 3 Delivery techniques of ds Boul/chitosan nano-particles in Bactrocera dorsalis | 第77-96页 |
| 3.1 Introduction | 第77-79页 |
| 3.2 Material Methods | 第79-83页 |
| 3.2.1 Preparation of ds RNA | 第79页 |
| 3.2.2 Preparation Methods of Chitosan Nanoparticles | 第79页 |
| 3.2.3 Preparation of ds RNA/ Chitosan with embedding method at different pH | 第79-80页 |
| 3.2.4 Preparation of ds RNA/ chitosan with absorbing method at different pH | 第80页 |
| 3.2.5 Effect of absorbing and embedding method with different mass ratios on dsRNA stability | 第80-81页 |
| 3.2.6 Effect of temperature on ds RNA/ Chitosan with embedding method: | 第81页 |
| 3.2.7 Effect of temperature on ds RNA/Chitosan with absorbing method: | 第81页 |
| 3.2.8 Effect of screened ds RNA mass ratios on nano-particle size | 第81-82页 |
| 3.2.9 Gene functioning of target gene ds RNA | 第82-83页 |
| 3.3 Results: | 第83-92页 |
| 3.3.1 Effect of PH on ds RNA stability | 第83-84页 |
| 3.3.2 Effect of ds RNA mass ratio on stability | 第84-86页 |
| 3.3.3 Stability assay after preparation of ds RNA/ Chitosan with embedding method | 第86-87页 |
| 3.3.4 Stability assay after preparation of ds RNA/ Chitosan with absorbing method | 第87-88页 |
| 3.3.5 Particle Size | 第88-90页 |
| 3.3.6 Effects of Nanoparticle/ds RNA effect on male sterility | 第90-91页 |
| 3.3.7 Number of Spermatozoa and live/dead sperm assay | 第91-92页 |
| 3.4 Discussion | 第92-96页 |
| Chapter 4 Effects of Chitosan/ds Boul treatment on sf9 cell line | 第96-111页 |
| 4.1 Introduction | 第96-98页 |
| 4.2 Materials and Methods | 第98-101页 |
| 4.2.1 Chemical and Reagents | 第98-99页 |
| 4.2.2 Cell Culture and Chitosan/ds Boul Treatment | 第99页 |
| 4.2.3 Ultrastructural Morphological Investigation: | 第99页 |
| 4.2.4 Cell Cycle Analysis | 第99-100页 |
| 4.2.5 Cell Apoptosis Detection by Double Staining Annexin V-FITC/PI Assay | 第100页 |
| 4.2.6 DNA Fragmentation Analysis | 第100页 |
| 4.2.7 Protein Extraction and Western Blotting | 第100-101页 |
| 4.2.8 Live/Dead Viability assay of Chitosan/ds Boul | 第101页 |
| 4.3 Results | 第101-108页 |
| 4.3.1 Cell cycle progression induced by Chitosan/ds Boul | 第101-103页 |
| 4.3.2 Apoptosis induction by Chitosan/ds Boul | 第103-104页 |
| 4.3.3 DNA Fragmentation induction by Chitosan/ds Boul | 第104-105页 |
| 4.3.4 The expression of Cell cycle and apoptosis related protein | 第105页 |
| 4.3.5 Influence of Chitosan/ds Boul on number of live/ dead cells | 第105-107页 |
| 4.3.6 Chitosan/ds Boul induce Nucleus, Mitochondria and Cell Membrane Ultra structure | 第107-108页 |
| 4.4 Disscusion | 第108-111页 |
| Chapter 5 SUMMARY | 第111-114页 |
| 5.1 Innovations | 第112页 |
| 5.2 Future perspectives | 第112-114页 |
| REFERENCES | 第114-146页 |
| ARTICLE PUBLISHED | 第146-147页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第147-148页 |
