| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1. 前言 | 第12-43页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12-13页 |
| 1.2 植物的抗病机制 | 第13-25页 |
| 1.2.1 PTI | 第13-16页 |
| 1.2.1.1 MAMP/PAMPs的种类 | 第13-14页 |
| 1.2.1.2 MAMP/PAMPs受体的种类 | 第14页 |
| 1.2.1.3 MAMP/PAMPs与受体的识别 | 第14-15页 |
| 1.2.1.4 PTI中的信号传导与防御反应 | 第15-16页 |
| 1.2.2 ETI | 第16-21页 |
| 1.2.2.1 效应子在宿主中的功能 | 第16-19页 |
| 1.2.2.2 ETI中R蛋白的种类 | 第19-20页 |
| 1.2.2.3 ETI的防御反应 | 第20-21页 |
| 1.2.3 已克隆的白叶枯病抗性基因 | 第21-23页 |
| 1.2.4 抗病基因的作用机制 | 第23-25页 |
| 1.3 TALEs类效应因子研究进展 | 第25-35页 |
| 1.3.1 TALEs类效应因子的发现 | 第25页 |
| 1.3.2 TALEs类效应因子的特点及功能 | 第25-33页 |
| 1.3.2.1 TALEs含有的结构域及功能 | 第25-30页 |
| 1.3.2.2 TALEs在宿主中的靶定基因及功能 | 第30-33页 |
| 1.3.3 TALEs的致病机理 | 第33-35页 |
| 1.3.3.1 TALEs自身的结构 | 第33-34页 |
| 1.3.3.2 TALEs激活感病基因的表达 | 第34-35页 |
| 1.3.3.3 TALEs的其他策略 | 第35页 |
| 1.4 TFIIA研究进展 | 第35-40页 |
| 1.4.1 TFIIA在基本转录起始中的角色 | 第35-38页 |
| 1.4.2 TFIIA的结构 | 第38-39页 |
| 1.4.3 Taspase1对TFIIA的裂解 | 第39-40页 |
| 1.4.4 水稻中TFIIAγ亚基的研究 | 第40页 |
| 1.5 本实验的工作基础 | 第40-42页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第42-43页 |
| 2. 材料与方法 | 第43-72页 |
| 2.1 本文中用到的仪器 | 第43-45页 |
| 2.2 本文中用到的耗材 | 第45-46页 |
| 2.3 实验材料 | 第46-53页 |
| 2.3.1 分子生物学实验中的菌株和载体 | 第46-48页 |
| 2.3.2 细菌培养中所需的固体、液体培养基及抗生素 | 第48页 |
| 2.3.3 实验中需要的溶液配方 | 第48-50页 |
| 2.3.4 本课题从构建载体到结晶过程中所需的试剂盒 | 第50页 |
| 2.3.5 其他材料的配备 | 第50-53页 |
| 2.4 实验方法 | 第53-72页 |
| 2.4.1 克隆载体的构建 | 第53-62页 |
| 2.4.1.1 感受态的制备 | 第54-55页 |
| 2.4.1.2 目的基因片段的获取 | 第55-57页 |
| 2.4.1.3 载体的制备 | 第57-58页 |
| 2.4.1.4 质粒的构建 | 第58页 |
| 2.4.1.5 质粒转化进入感受态细胞 | 第58-59页 |
| 2.4.1.6 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第59页 |
| 2.4.1.7 pQLink载体克隆构建 | 第59-61页 |
| 2.4.1.8 阳性克隆转化、细菌培养和诱导 | 第61-62页 |
| 2.4.2 蛋白纯化相关的技术和方法 | 第62-65页 |
| 2.4.3 蛋白限制性酶解的技术和方法 | 第65-66页 |
| 2.4.4 蛋白结晶相关的技术和方法 | 第66-68页 |
| 2.4.5 数据的收集与处理 | 第68页 |
| 2.4.6 Pull-down的方法 | 第68-69页 |
| 2.4.7 双链DNA退火 | 第69页 |
| 2.4.8 凝胶迁移实验 | 第69-70页 |
| 2.4.9 凝胶排阻色谱 | 第70-71页 |
| 2.4.10 硒代甲硫氨酸替换培养 | 第71-72页 |
| 3. 结果与分析 | 第72-125页 |
| 3.1 探索TALEs与TFIIA三元复合物相互作用关系 | 第72-83页 |
| 3.1.1 TALEs与TFIIAγ5互作验证 | 第72-73页 |
| 3.1.2 dHax3不能与TFIIA三元复合物互作 | 第73-81页 |
| 3.1.3 dHax3仅与水稻TFIIA(α+γ)二元复合物互作 | 第81-83页 |
| 3.2 TALEs的TFB区域负责招募水稻TFIIA(α+γ)二元复合物 | 第83-95页 |
| 3.3 TALEs+α+y复合物结合DNA | 第95-96页 |
| 3.4 TFB+α+γ复合物招募TBP | 第96-101页 |
| 3.5 TALEs激活转录的分子机制的初步探索 | 第101-125页 |
| 3.5.1 尝试解析TFB+α+γ复合物晶体结构 | 第103页 |
| 3.5.2 尝试解析TFB+γ复合物晶体结构 | 第103-112页 |
| 3.5.2.1 TFIIAγ5蛋白的表达 | 第103-105页 |
| 3.5.2.2 全长TFB蛋白与TFIIAγ5蛋白的共表达尝试 | 第105-108页 |
| 3.5.2.3 TFB蛋白的同源蛋白表达尝试 | 第108-109页 |
| 3.5.2.4 TFB与TFIIAγ5串联表达尝试 | 第109-111页 |
| 3.5.2.5 TFB与TFIIAγ5用pQLink载体表达尝试 | 第111-112页 |
| 3.5.3 尝试解析TFB-Linker-TFIIA (α+β+γ)晶体结构 | 第112-118页 |
| 3.5.3.1 TFB-Linker-TFIIA(α+β+γ)复合物的获得 | 第112-116页 |
| 3.5.3.2 TFB-Linker-TFIIA(α+β+γ)复合物晶体筛选与优化 | 第116-117页 |
| 3.5.3.3 TFB-Linker-TFIIA(α+β+γ)晶体数据收集与分析 | 第117-118页 |
| 3.5.4 尝试解析TFIIA (α+β+γ)复合物晶体结构 | 第118-125页 |
| 3.5.4.1 TFIIA (α+β+γ)三元复合物晶体的筛选与优化 | 第118-120页 |
| 3.5.4.2 TFIIA(α+β+γ)复合物晶体结构解析 | 第120-122页 |
| 3.5.4.3 水稻TFIIA与人TFIIA结构对比分析 | 第122-123页 |
| 3.5.4.4 水稻TFIIA三元复合物表面电荷分析 | 第123-125页 |
| 4. 讨论 | 第125-133页 |
| 4.1 TALEs致病新机制的提出与深入思考 | 第125-127页 |
| 4.2 Pth-TFBA1044-M1115与α+γ如何互作的探讨 | 第127-132页 |
| 4.3 Pth-TFBA1044-M1115+α+γ异源三元复合物与TBP互作的探讨 | 第132-133页 |
| 4.4 未来计划 | 第133页 |
| 5. 总结 | 第133-135页 |
| 6. 参考文献 | 第135-162页 |
| 7. 附录 | 第162-169页 |
| 附A | 第162-168页 |
| 附A1 效应子dHax3的序列 | 第162-163页 |
| 附A2 效应子PthXo1的序列 | 第163-166页 |
| 附A3 TFIIAαβ的序列 | 第166-167页 |
| 附A4 TFIIAγ5的序列 | 第167页 |
| 附A5 TBP序列 | 第167-168页 |
| 附B | 第168-169页 |
| 致谢 | 第169-171页 |
