| 摘要 | 第2-3页 |
| ABSTRACT | 第3页 |
| 文献综述 | 第6-13页 |
| 1.1 青霉素G酰化酶 | 第6-8页 |
| 1.1.1 青霉素G酰化酶的分类 | 第6页 |
| 1.1.2 青霉素G酰化酶的结构 | 第6页 |
| 1.1.3 影响青霉素G酰化酶活性的因素 | 第6-7页 |
| 1.1.4 青霉素G酰化酶的应用 | 第7-8页 |
| 1.2 产PGA的基因工程菌的研究进展 | 第8-11页 |
| 1.2.1 生产菌种及其选育 | 第8-10页 |
| 1.2.2 受体菌种选择及优势分析 | 第10-11页 |
| 1.3 发酵产PGA的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3.1 基因工程菌产青霉素G酰化酶培养基的研究 | 第11页 |
| 1.3.2 基因工程菌产青霉素G酰化酶发酵条件的研究 | 第11-13页 |
| 1.前言 | 第13-14页 |
| 2.材料与方法 | 第14-27页 |
| 2.1 材料 | 第14-15页 |
| 2.1.1 菌种 | 第14页 |
| 2.1.2 主要试验仪器 | 第14-15页 |
| 2.1.3 主要试验试剂 | 第15页 |
| 2.2 培养基 | 第15-16页 |
| 2.2.1 初始发酵培养基 | 第15-16页 |
| 2.2.2 初始发酵条件 | 第16页 |
| 2.3 试验方法 | 第16-17页 |
| 2.3.1 培养方法 | 第16页 |
| 2.3.2 测定方法 | 第16-17页 |
| 2.4 试验设计 | 第17-26页 |
| 2.4.1 出发菌种产PGA酶活的测定 | 第17页 |
| 2.4.2 青霉素G酰化酶基因工程菌的构建 | 第17-25页 |
| 2.4.3 重组菌产PGA发酵培养基优化 | 第25页 |
| 2.4.4 重组菌产PGA发酵条件优化 | 第25-26页 |
| 2.5 数据处理与统计 | 第26-27页 |
| 3.结果与分析 | 第27-46页 |
| 3.1 出发菌种产PGA酶活的测定 | 第27-28页 |
| 3.1.1PGA标准曲线的制作 | 第27页 |
| 3.1.2 巨大芽孢杆菌产PGA的酶活测定 | 第27-28页 |
| 3.1.3 枯草芽孢杆菌产PGA的酶活测定 | 第28页 |
| 3.2 青霉素G酰化酶基因工程菌的构建 | 第28-33页 |
| 3.2.1 巨大芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第28页 |
| 3.2.2 PGA基因扩增PCR电泳 | 第28-29页 |
| 3.2.3 pGM-T-PGA及pMA5双酶切 | 第29-30页 |
| 3.2.4 pMA5-PGA重组体双酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.5 pMA5-PGA重组体PCR鉴定 | 第31页 |
| 3.2.6 pMA5-PGA重组体序列测定 | 第31页 |
| 3.2.7 重组菌的表达及PGA酶活力检测 | 第31-32页 |
| 3.2.8 pMA5-PGA质粒稳定性检测结果 | 第32-33页 |
| 3.3 重组菌产PGA发酵培养基的优化 | 第33-38页 |
| 3.3.1 单因素试验结果 | 第33-35页 |
| 3.3.2 响应面试验结果 | 第35-38页 |
| 3.4 重组菌产PGA发酵条件的优化 | 第38-46页 |
| 3.4.1 单因素试验结果 | 第38-42页 |
| 3.4.2 响应面试验结果 | 第42-46页 |
| 4.讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 产PGA枯草芽孢杆菌工程菌株的构建 | 第46页 |
| 4.2 发酵培养基对重组菌产PGA的影响 | 第46-48页 |
| 4.3 发酵条件对重组菌产PGA的影响 | 第48-50页 |
| 5.结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简介 | 第55-56页 |
| 导师简介 | 第56-57页 |