| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 己酸 | 第8页 |
| 1.1.1 己酸的理化性质及应用领域 | 第8页 |
| 1.2 己酸制备方式 | 第8-9页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第8-9页 |
| 1.2.2 微生物发酵法 | 第9页 |
| 1.3 己酸合成微生物 | 第9-10页 |
| 1.4 克氏梭菌发酵产己酸的研究历史与现状 | 第10-11页 |
| 1.5 克氏梭菌进行己酸合成的特点 | 第11页 |
| 1.6 本课题立题依据及意义 | 第11-12页 |
| 1.7 本课题的研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 引物 | 第15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15-16页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第16页 |
| 2.1.6 试剂盒和分子实验工具酶 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 菌株活化、保藏及培养 | 第17页 |
| 2.2.2 克氏梭菌全基因组提取 | 第17页 |
| 2.2.3 RNA制备和反转录-荧光定量PCR | 第17-18页 |
| 2.2.4 RNA-Seq测序及数据处理 | 第18页 |
| 2.2.5 基因的克隆与表达载体的构建 | 第18-20页 |
| 2.2.6 克氏梭菌的电击转化 | 第20-21页 |
| 2.2.7 发酵底物和产物分析方法 | 第21页 |
| 2.2.8 硫解酶的纯化 | 第21页 |
| 2.2.9 硫解酶酶活力测定 | 第21-22页 |
| 2.2.10 lacZ酶活力的测定 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-44页 |
| 3.1 克氏梭菌产己酸代谢途径关键基因的表达水平分析 | 第24-27页 |
| 3.1.1 克氏梭菌己酸发酵动力学特征 | 第24-25页 |
| 3.1.2 克氏梭菌己酸合成途径关键酶编码基因的鉴定 | 第25-27页 |
| 3.1.3 小结 | 第27页 |
| 3.2 克氏梭菌己酸合成关键酶硫解酶的功能解析 | 第27-34页 |
| 3.2.1 硫解酶编码基因thlA1、thlA2、thlA3同源性分析 | 第27-28页 |
| 3.2.2 克氏梭菌产己酸关键基因硫解酶编码基因表达水平分析(RT-qPCR检测) | 第28-30页 |
| 3.2.3 克氏梭菌硫解酶在大肠杆菌中的克隆及表达 | 第30-31页 |
| 3.2.4 硫解酶的酶学性质分析 | 第31-33页 |
| 3.2.5 小结 | 第33-34页 |
| 3.3 克氏梭菌遗传操作系统构建 | 第34-44页 |
| 3.3.1 克氏梭菌限制性修饰系统的分析 | 第34页 |
| 3.3.2 在大肠杆菌中构建针对克氏梭菌基因组DNA的甲基转移酶修饰系统 | 第34-37页 |
| 3.3.3 克氏梭菌电转条件的优化 | 第37-39页 |
| 3.3.4 克氏梭菌启动子报告系统的构建 | 第39-40页 |
| 3.3.5 丙酮丁醇来源双功能醇醛脱氢酶(AdhE2)在克氏梭菌中的异源表达 | 第40-41页 |
| 3.3.6 硫解酶过表达对克氏梭菌产酸代谢的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.7 小结 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
