| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 木聚糖酶 | 第8-12页 |
| 1.1.1 木聚糖酶简介 | 第8页 |
| 1.1.2 木聚糖酶的构成 | 第8-11页 |
| 1.1.3 木聚糖酶应用 | 第11-12页 |
| 1.2 木聚糖酶的开发 | 第12-15页 |
| 1.2.1 新来源的木聚糖酶的发掘 | 第12页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的改造与优化 | 第12-15页 |
| 1.3 Clostridium clariflavum来源的木聚糖酶研究进展 | 第15页 |
| 1.4 立题依据与主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 培养基与溶液 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第18页 |
| 2.2 木聚糖酶不同结构域组合表达及酶学性质研究方法 | 第18-22页 |
| 2.2.1 不同结构域组合表达 | 第18-19页 |
| 2.2.2 不同组合的重组质粒构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 重组菌的诱导表达 | 第20-21页 |
| 2.2.4 木聚糖酶的酶活测定 | 第21页 |
| 2.2.5 重组木聚糖酶的纯化 | 第21页 |
| 2.2.6 重组木聚糖酶酶学性质测定 | 第21-22页 |
| 2.3 木聚糖酶rXyn2441GH10的分子改造方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 N端氨基酸分析与截短设计 | 第22-23页 |
| 2.3.2 N端截短表达突变体构建 | 第23页 |
| 2.3.3 突变体的诱导表达及分离纯化 | 第23页 |
| 2.3.4 突变体的酶学性质测定 | 第23页 |
| 2.3.5 突变体的圆二色性光谱分析 | 第23-24页 |
| 2.4 关键氨基酸的定点突变分析方法 | 第24-26页 |
| 2.4.1 保守氨基酸位点的选取 | 第24页 |
| 2.4.2 定点突变体构建及表达 | 第24-25页 |
| 2.4.3 定点突变体的诱导表达及分离纯化 | 第25页 |
| 2.4.4 定点突变体前后酶活对比分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-46页 |
| 3.1 木聚糖酶不同结构域组合表达及酶学性质研究 | 第26-34页 |
| 3.1.1 不同结构域组合表达设计 | 第26-27页 |
| 3.1.2 不同结构域组合的克隆表达以及分离纯化 | 第27-30页 |
| 3.1.3 木聚糖酶rXyn2441GH10的酶学性质研究 | 第30-34页 |
| 3.2 木聚糖酶rXyn2441GH10的分子改造 | 第34-42页 |
| 3.2.1 N末端氨基酸分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 N末端氨基酸截短设计 | 第35页 |
| 3.2.3 截短突变体的重组菌株构建 | 第35-36页 |
| 3.2.4 截短突变体的诱导表达和分离纯化 | 第36-38页 |
| 3.2.5 截短突变体的酶学性质研究 | 第38-40页 |
| 3.2.6 截短突变体的圆二色性分析 | 第40-42页 |
| 3.3 木聚糖酶rXyn2441GH10的保守位点分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 保守氨基酸的分析与确定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 保守氨基酸的定点突变 | 第43-44页 |
| 3.3.3 突变前后酶活对比分析 | 第44页 |
| 3.3.4 保守关键氨基酸功能分析 | 第44-46页 |
| 主要结论及展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
