| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 中英文缩略词对照表 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 植物甾醇概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 植物甾醇及其理化性质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 植物甾醇的生理功能 | 第15-16页 |
| 1.1.3 植物甾醇的安全性评价 | 第16-17页 |
| 1.1.4 植物甾醇的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 植物甾醇的生产方法 | 第18-19页 |
| 1.2.1 植物提取法 | 第18页 |
| 1.2.2 生物合成法 | 第18-19页 |
| 1.3 甾醇类化合物的生物合成途径 | 第19-24页 |
| 1.3.1 麦角固醇的生物合成概述 | 第19-21页 |
| 1.3.2 甾醇类化合物的生物合成途径 | 第21-24页 |
| 1.4 解脂亚罗酵母菜油甾醇合成相关代谢工程研究 | 第24-25页 |
| 1.4.1 解脂亚罗酵母概述 | 第24页 |
| 1.4.2 利用解脂亚罗酵母合成菜油甾醇研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 研究目的、意义及内容 | 第25-28页 |
| 1.5.1 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 基于GC-MS/SIM检测酵母中甾醇类化合物方法的建立 | 第28-40页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 菌株 | 第29页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第29页 |
| 2.2.3 标准溶液的配置 | 第29-30页 |
| 2.3 试验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 气质联用分析甾醇含量 | 第30页 |
| 2.3.2 方法学考察建立方法有效性 | 第30-32页 |
| 2.3.3 皂化提取菌体中的甾醇 | 第32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.4.1 内标物的选择 | 第32-33页 |
| 2.4.2 方法专属性的考察 | 第33-34页 |
| 2.4.3 特征离子的选择、线性范围和检出限 | 第34-36页 |
| 2.4.4 方法的精密度、稳定性及加标回收率 | 第36-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 高产菜油甾醇的解脂亚罗酵母菌株的构建 | 第40-64页 |
| 3.1 前言 | 第40-42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1 质粒和菌株 | 第42-43页 |
| 3.2.2 培养基 | 第43页 |
| 3.2.3 试剂和酶 | 第43-44页 |
| 3.2.4 仪器和设备 | 第44页 |
| 3.3 试验方法 | 第44-50页 |
| 3.3.1 解脂亚罗酵母菌株基因组DNA的提取 | 第44-45页 |
| 3.3.2 目标基因的PCR扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.3 琼脂糖凝胶电泳及PCR产物的纯化 | 第46-47页 |
| 3.3.4 限制性内切酶酶切及酶切产物的连接 | 第47页 |
| 3.3.5 大肠杆菌的转化 | 第47-48页 |
| 3.3.6 质粒的提取及酶切验证 | 第48页 |
| 3.3.7 解脂亚罗酵母的转化 | 第48-49页 |
| 3.3.8 基因敲除菌株的筛选、验证及URA3标记的去除 | 第49-50页 |
| 3.3.9 生物量及细胞干重的测定 | 第50页 |
| 3.3.10 甾醇含量分析 | 第50页 |
| 3.4 结果与分析 | 第50-62页 |
| 3.4.1 ERG5基因敲除质粒的构建及验证 | 第50-53页 |
| 3.4.2 ERG5-菌株的筛选 | 第53-55页 |
| 3.4.3 DHCR7表达质粒的构建及转化 | 第55-57页 |
| 3.4.4 重组菌株YL-PE甾醇产物确认及产量分析 | 第57-60页 |
| 3.4.5 重组菌株的发酵罐发酵 | 第60-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 菜油甾醇合成与油脂积累关系的研究 | 第64-82页 |
| 4.1 前言 | 第64-65页 |
| 4.2 实验材料 | 第65-67页 |
| 4.2.1 质粒和菌株 | 第65-67页 |
| 4.2.2 培养基 | 第67页 |
| 4.2.3 酶和试剂 | 第67页 |
| 4.2.4 仪器和设备 | 第67页 |
| 4.3 试验方法 | 第67-71页 |
| 4.3.1 脂肪酸产量分析 | 第67-68页 |
| 4.3.2 酵母总RNA的提取及反转录 | 第68-69页 |
| 4.3.3 qPCR基因表达水平的检测 | 第69-71页 |
| 4.4 结果与分析 | 第71-79页 |
| 4.4.1 不同油脂产量菌株中合成菜油甾醇途径的重构及其产量分析 | 第71-74页 |
| 4.4.2 DHCR7多拷贝质粒的构建表达及其产量分析 | 第74-77页 |
| 4.4.3 DHCR7基因相对表达量的分析 | 第77-79页 |
| 4.4.4 重组菌株的发酵罐发酵 | 第79页 |
| 4.5 本章小结 | 第79-82页 |
| 第五章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 5.1 结论 | 第82-83页 |
| 5.2 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第94页 |
