| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 部分缩写词及符号说明表 | 第6-10页 |
| 一、前言 | 第10-18页 |
| 1 鸭病毒性肝炎简介 | 第10-11页 |
| 2 小RNA病毒VP2和VP4的研究进展 | 第11-14页 |
| 2.1 VP2的研究 | 第11-13页 |
| 2.2 VP4的研究 | 第13-14页 |
| 3 DHAV实验室诊断技术 | 第14-16页 |
| 3.1 DHAV血清学诊断 | 第14-16页 |
| 3.2 分子生物学诊断 | 第16页 |
| 4 选题目的及意义 | 第16-18页 |
| 二、试验研究 | 第18-46页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| 1.1 毒株、菌种、血清和试验动物 | 第18页 |
| 1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.3 其他试验材料 | 第19页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 3 试验方法 | 第21-31页 |
| 3.1 VP2和VP4基因克隆 | 第21-26页 |
| 3.1.1 引物设计 | 第21页 |
| 3.1.2 DHAV-3的增殖及纯化 | 第21-22页 |
| 3.1.3 DHAV-3QL株基因组RNA的提取 | 第22页 |
| 3.1.4 VP2和VP4基因片段扩增 | 第22-24页 |
| 3.1.5 原核表达pET32a-(+)/VP4、pET30a-(+)/VP2重组质粒的构建和鉴定 | 第24-26页 |
| 3.2 VP2、VP4蛋白表达、纯化及鉴定 | 第26-28页 |
| 3.2.1 VP2、VP4蛋白表达、优化 | 第26-27页 |
| 3.2.2 重组蛋白VP2、VP4的纯化及鉴定 | 第27-28页 |
| 3.3 基于VP2和VP4蛋白DHAV-3间接ELISA检测方法的优化和评估 | 第28-31页 |
| 3.3.1 基于VP2和VP4蛋白DHAV-3间接ELISA检测方法的优化 | 第28-30页 |
| 3.3.2 间接ELISA检测方法的评测 | 第30-31页 |
| 4 试验结果 | 第31-46页 |
| 4.1 重组质粒PET30-VP2和PET32-VP4的构建 | 第31-33页 |
| 4.1.1 VP2和VP4基因片段扩增 | 第31页 |
| 4.1.2 VP2和VP4基因原核表达质粒的构建 | 第31-33页 |
| 4.2 重组蛋白VP2和VP4的表达、纯化及鉴定 | 第33-35页 |
| 4.2.1 重组蛋白VP2和VP4的表达 | 第33-34页 |
| 4.2.2 重组蛋白VP2和VP4的纯化及鉴定 | 第34-35页 |
| 4.3 以VP2和VP4为包被抗原的间接ELISA检测方法的建立 | 第35-46页 |
| 4.3.1 基于VP2和VP4蛋白间接ELISA检测条件的优化 | 第35-41页 |
| 4.3.2 间接ELISA检测方法临界值的检测 | 第41-46页 |
| 4.3.2.1 基于VP2和VP4蛋白间接ELISA检测方法临界值的确定 | 第41-42页 |
| 4.3.2.2 VP2和VP4蛋白重复性评价 | 第42-43页 |
| 4.3.2.3 特异性评价 | 第43-44页 |
| 4.3.2.4 灵敏性评价 | 第44-45页 |
| 4.3.2.5 符合率的计算 | 第45-46页 |
| 三、讨论 | 第46-49页 |
| 1 VP2和VP4基因蛋白作用特点和原核表达、纯化分析 | 第46-48页 |
| 2 基于VP2和VP4蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第48-49页 |
| 四、结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
