| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 一、引言 | 第10-16页 |
| 1. 鸭肝炎概述 | 第10-11页 |
| 1.1 病毒分型 | 第10页 |
| 1.2 流行与分布清况 | 第10页 |
| 1.3 流行病学 | 第10-11页 |
| 1.4 病原特性 | 第11页 |
| 2. DHAV-1的检测方法 | 第11页 |
| 3. 1型鸭甲肝病毒(DHAV-1)基因组特征 | 第11-12页 |
| 4. 3A蛋白亚细胞定位及功能特点 | 第12-14页 |
| 4.1 3A基因组的特征 | 第12页 |
| 4.2 3A蛋白的特征 | 第12-13页 |
| 4.3 3A蛋白的亚细胞定位和功能 | 第13-14页 |
| 4.3.1 3A亚细胞定位 | 第13-14页 |
| 4.3.2 3A作为3D聚合酶锚定功能 | 第14页 |
| 4.3.3 3A蛋白对病毒复制的影响 | 第14页 |
| 5. 目的及意义 | 第14-16页 |
| 二、试验研究 | 第16-49页 |
| 1. 实验材料 | 第16-18页 |
| 1.1 毒株、菌株、质粒 | 第16页 |
| 1.2 血清和实验动物 | 第16页 |
| 1.3 主要试剂与耗材 | 第16-17页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第17-18页 |
| 1.4.1 基因克隆表达所需配制试剂 | 第17页 |
| 1.4.2 蛋白表达、检测所需主要试剂 | 第17页 |
| 1.4.3 Western blot相关试剂的配制 | 第17-18页 |
| 1.4.4 亚细胞定位相关试剂的配制 | 第18页 |
| 1.4.5 间接ELISA相关试剂的配制 | 第18页 |
| 1.5 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2 试验方法 | 第18-31页 |
| 2.1 DHAV-13A-198的原核表达、纯化及鉴定 | 第18-27页 |
| 2.1.1 DHAV-1病毒增殖 | 第18页 |
| 2.1.2 病毒RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.1.3 3A基因的扩增 | 第19-20页 |
| 2.1.4 PCR产物的回收 | 第20-21页 |
| 2.1.5 感受态细胞的制备 | 第21页 |
| 2.1.6 3A-198基因的T-载体克隆 | 第21-22页 |
| 2.1.7 原核表达质粒pET-32-3A-198的构建 | 第22-23页 |
| 2.1.8 3A-198的原核表达和蛋白的鉴定、纯化 | 第23-27页 |
| 2.2 重组蛋白抗血清制备以及3A蛋白的亚细胞定位 | 第27-29页 |
| 2.2.1 鼠抗3A-198多克隆抗体的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.2 3A-198抗血清琼扩效价测定 | 第28页 |
| 2.2.3 3A-198抗血清的Western blot分析 | 第28页 |
| 2.2.4 DHAV-1 3A蛋白的亚细胞定位 | 第28-29页 |
| 2.3 基于3A-198蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第29-31页 |
| 2.3.1 ELISA操作步驟 | 第29页 |
| 2.3.2 3A-198间接ELISA实验方法优化 | 第29-30页 |
| 2.3.3 3A-198间接ELISA方法评f介 | 第30-31页 |
| 2.3.4 3A-198间接ELISA和DHAV-1间接ELISA之间的符合率评估 | 第31页 |
| 3结果 | 第31-46页 |
| 3.1DHAV-13A-198的原核表达、纯化及鉴定 | 第31-35页 |
| 3.1.1 3A-198基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.1.2 表达载体的构建和鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.3 3A-198的表級纯化 | 第33-34页 |
| 3.1.4 融合蛋白Western blot分析 | 第34-35页 |
| 3.2 重组蛋白抗血清制备以及3A蛋白的亚细胞定位 | 第35-38页 |
| 3.2.1 重组蛋白多克隆抗体效价测定 | 第35页 |
| 3.2.2 3A蛋白的亚细胞定位 | 第35-38页 |
| 3.3 基于3A-198蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第38-46页 |
| 3.3.1 3A-198间接ELISA方法的优化 | 第38-42页 |
| 3.3.2 3A-198间接ELISA方法的评价 | 第42-45页 |
| 3.3.3 3A-198间接ELISA和DHAV-1间接ELISA符合率评估 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-49页 |
| 4.1 DHAV-1 3A-198的原核表达、纯化及鉴定 | 第46页 |
| 4.2 重组蛋白抗血清制备以及3A蛋白的亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 4.3 基于3A-198蛋白的间接ELISA方法的建立 | 第47-49页 |
| 三、结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第57页 |
