| 中文摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-28页 |
| 1.1 植物生物质的异质性与抗降解屏障 | 第15-18页 |
| 1.1.1 纤维素和木质素的分子结构 | 第16-17页 |
| 1.1.2 木聚糖的分子结构 | 第17-18页 |
| 1.2 降解木聚糖的相关酶类 | 第18-20页 |
| 1.2.1 木聚糖主链降解酶类 | 第18-19页 |
| 1.2.2 木聚糖侧链降解酶类 | 第19-20页 |
| 1.3 木聚糖酶的工业应用及其问题 | 第20-22页 |
| 1.3.1 木聚糖酶在饲料行业的应用 | 第20页 |
| 1.3.2 木聚糖酶在食品行业的应用 | 第20-21页 |
| 1.3.3 木聚糖酶在造纸行业的应用 | 第21页 |
| 1.3.4 木聚糖酶在医药行业的应用 | 第21页 |
| 1.3.5 木聚糖酶在能源行业的应用 | 第21-22页 |
| 1.3.6 木聚糖酶工业应用中存在的问题 | 第22页 |
| 1.4 高效工业酶的筛选策略 | 第22页 |
| 1.5 高效工业酶的分子改造策略 | 第22-26页 |
| 1.5.1 蛋白质工程的发展阶段 | 第23-24页 |
| 1.5.2 生物大数据时代及其工程化改造趋势 | 第24页 |
| 1.5.3 蛋白质功能区概念的提出 | 第24-25页 |
| 1.5.4 大数据时代下酶分子的设计策略 | 第25-26页 |
| 1.6 立项依据 | 第26-28页 |
| 第二章 高效木聚糖酶GH11家族的结构生物信息学分析 | 第28-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.1.1 结构生物信息学分析的常用软件 | 第28-29页 |
| 2.1.2 结构生物信息学分析的常用网站 | 第29页 |
| 2.1.3 GH11家族酶分子的结构比对 | 第29-30页 |
| 2.1.4 GH11家族碱性酶和耐盐酶的搜索与性质分析 | 第30页 |
| 2.1.5 TlXynA与耐受性酶的系统发育树构建 | 第30页 |
| 2.1.6 TlXynA与耐受性酶的序列比对分析 | 第30-31页 |
| 2.1.7 GH11家族表面带电残基序列谱的绘制与分析 | 第31页 |
| 2.2 结果与分析 | 第31-42页 |
| 2.2.1 GH11家族酶分子结构比对分析 | 第31-32页 |
| 2.2.2 TlXynA与耐受性酶的系统发育树构建 | 第32-33页 |
| 2.2.3 TlXynA与GH11家族碱性酶的比较分析 | 第33-35页 |
| 2.2.4 TlXynA与GH11家族耐盐酶的比较分析 | 第35-37页 |
| 2.2.5 TlXynA与GH11家族碱性酶和耐盐酶的序列比对分析 | 第37-38页 |
| 2.2.6 GH11家族表面带电残基序列谱的绘制与功能预测 | 第38-41页 |
| 2.2.7 TlXynA突变位点的展示与虚拟突变 | 第41-42页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 热稳定性TlXynA的耐碱性设计及其实验验证 | 第43-62页 |
| 3.1 材料与方法 | 第43-51页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 仪器 | 第43-44页 |
| 3.1.3 试剂与药品 | 第44页 |
| 3.1.4 主要培养基及成分 | 第44-45页 |
| 3.1.5 主要缓冲液 | 第45页 |
| 3.1.6 突变质粒的构建 | 第45-47页 |
| 3.1.7 TlXynA及其耐碱突变体的异源表达 | 第47-48页 |
| 3.1.8 TlXynA及其耐碱突变体酶活的测定 | 第48-49页 |
| 3.1.9 TlXynA及其耐碱突变体分子动力学参数的测定 | 第49页 |
| 3.1.10 TlXynA及其耐碱突变体产物谱的测定 | 第49-50页 |
| 3.1.11 TlXynA及其耐碱突变体热稳定性的测定 | 第50-51页 |
| 3.1.12 TlXynA及其耐碱突变体耐碱性的测定 | 第51页 |
| 3.1.13 TlXynA及其相关耐碱突变体的分子动力学模拟 | 第51页 |
| 3.1.14 D97R突变体验证选点原则的可行性分析 | 第51页 |
| 3.2 结果与分析 | 第51-61页 |
| 3.2.1 定点突变PCR实验结果 | 第51-52页 |
| 3.2.2 突变质粒的提取结果 | 第52页 |
| 3.2.3 TlXynA及其耐碱突变体的表达 | 第52-53页 |
| 3.2.4 TlXynA及其耐碱突变体的酶活 | 第53-54页 |
| 3.2.5 TlXynA及其耐碱突变体的分子动力学参数测定 | 第54-55页 |
| 3.2.6 TlXynA及其耐碱突变体的产物谱变化 | 第55-56页 |
| 3.2.7 TlXynA及其耐碱突变体的DSC测定 | 第56-57页 |
| 3.2.8 TlXynA及其耐碱突变体的耐碱性分析 | 第57-58页 |
| 3.2.9 分子动力学模拟探究TlXynA及其相关耐碱突变体的稳定性 | 第58-60页 |
| 3.2.10 D97R突变体证实选点原则的可行性 | 第60-61页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第61-62页 |
| 第四章 热稳定性T7XynA的耐盐性设计及其实验验证 | 第62-75页 |
| 4.1 材料与方法 | 第62-67页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第62页 |
| 4.1.2 仪器 | 第62页 |
| 4.1.3 试剂与药品 | 第62页 |
| 4.1.4 主要培养基及成分 | 第62-63页 |
| 4.1.5 主要缓冲液 | 第63页 |
| 4.1.6 主要含盐底物 | 第63页 |
| 4.1.7 突变质粒的构建 | 第63-64页 |
| 4.1.8 TlXynA及其耐盐突变体的异源表达 | 第64页 |
| 4.1.9 TlXynA及其耐盐突变体酶活的测定 | 第64页 |
| 4.1.10 TlXynA及其耐盐突变体分子动力学参数的测定 | 第64-65页 |
| 4.1.11 TlXynA及其耐盐突变体的荧光光谱测定 | 第65-66页 |
| 4.1.12 TlXynA及其耐盐突变体产物谱的测定 | 第66页 |
| 4.1.13 TlXynA及其耐盐突变体热稳定性的测定 | 第66页 |
| 4.1.14 TlXynA及其耐盐突变体耐盐性的测定 | 第66-67页 |
| 4.2 结果与分析 | 第67-74页 |
| 4.2.1 定点突变PCR实验结果 | 第67页 |
| 4.2.2 突变质粒的提取结果 | 第67页 |
| 4.2.3 TlXynA及其耐盐突变体的异源表达 | 第67-68页 |
| 4.2.4 TlXynA及其耐盐突变体的酶活 | 第68-69页 |
| 4.2.5 TlXynA及其耐盐突变体的分子动力学参数 | 第69-70页 |
| 4.2.6 TlXynA及其耐盐突变体的荧光扫描 | 第70-71页 |
| 4.2.7 TlXynA及其耐盐突变体的产物谱变化 | 第71-72页 |
| 4.2.8 TlXynA及其耐盐突变体的DSC测定与分析 | 第72-73页 |
| 4.2.9 TlXynA及其耐盐突变体的耐盐性变化 | 第73-74页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 耐碱性设计策略在糖苷水解酶GH12家族的应用 | 第75-87页 |
| 5.1 材料与方法 | 第75-79页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第75页 |
| 5.1.2 试剂与药品 | 第75-76页 |
| 5.1.3 主要培养基及成分 | 第76页 |
| 5.1.4 主要缓冲液 | 第76页 |
| 5.1.5 TrCel12A耐碱性突变体的确定 | 第76-77页 |
| 5.1.6 突变质粒的构建 | 第77页 |
| 5.1.7 TrCel12A及其耐碱突变体的异源表达 | 第77-78页 |
| 5.1.8 TrCel12A及其耐碱突变体的酶活测定 | 第78页 |
| 5.1.9 TrCel12A及其耐碱突变体的动力学参数测定 | 第78页 |
| 5.1.10 TrCel12A及其耐碱突变体的热稳定性测定 | 第78页 |
| 5.1.11 TrCel12A及其耐碱突变体的产物谱测定 | 第78页 |
| 5.1.12 TrCel12A及其耐碱突变体的耐碱性测定 | 第78-79页 |
| 5.2 结果与分析 | 第79-86页 |
| 5.2.1 TrCel12A与三个碱性酶的结构生物信息学分析 | 第79-81页 |
| 5.2.2 TrCel12A及其耐碱突变体的异源表达 | 第81-82页 |
| 5.2.3 TrCel12A及其耐碱突变体的酶活和稳定性 | 第82-83页 |
| 5.2.4 TrCel12A及其耐碱突变体的分子动力学参数 | 第83-84页 |
| 5.2.5 TrCel12A及其耐碱突变体的产物谱变化 | 第84-85页 |
| 5.2.6 TrCel12A及其耐碱突变体的耐碱性 | 第85-86页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第86-87页 |
| 全文总结与展望 | 第87-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102-103页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第103页 |
