| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第14-31页 |
| 第一章 猪瘟病毒研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1 病原学 | 第14-18页 |
| 1.1.1 CSFV的发现与分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 CSFV基因组结构及其编码蛋白 | 第15-18页 |
| 1.2 CSFV与宿主相互作用 | 第18-22页 |
| 1.2.1 宿主蛋白调控CSFV的复制 | 第19页 |
| 1.2.2 病毒蛋白调控宿主天然免疫 | 第19页 |
| 1.2.3 宿主蛋白与CSFV相互作用调控CSFV的毒力 | 第19-22页 |
| 第二章 uS10和TRAF6研究进展 | 第22-31页 |
| 2.1 uS10研究进展 | 第22-26页 |
| 2.1.1 核糖体蛋白相关研究 | 第22-25页 |
| 2.1.2 uS10相关研究 | 第25-26页 |
| 2.2 TRAF6研究进展 | 第26-31页 |
| 2.2.1 TRAF6的结构 | 第26页 |
| 2.2.2 TRAF6在信号转导及免疫应答中的研究进展 | 第26-29页 |
| 2.2.3 TRAF6与病毒的相互作用 | 第29-31页 |
| 试验研究 | 第31-91页 |
| 第三章 酵母双杂交筛选与CSFVN~(pro)和NS3相互作用的宿主细胞蛋白 | 第31-49页 |
| 3.1 材料 | 第31-32页 |
| 3.1.1 菌株、质粒与文库 | 第31-32页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第32页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-36页 |
| 3.2.1 诱饵载体pGBKT7-N~(pro)和pGBKT7-NS3的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 重组质粒pGBKT7-N~(pro)和pGBKT7-NS3毒性与自激活检测 | 第33-34页 |
| 3.2.3 酵母双杂交(Y2H与Y187交配)试验 | 第34-35页 |
| 3.2.4 阳性菌落的PCR鉴定 | 第35页 |
| 3.2.5 文库质粒的解救与测序 | 第35页 |
| 3.2.6 功能分类和通路分析 | 第35页 |
| 3.2.7 构建N~(pro)/NS3与胞内蛋白相互作用的网络图 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-45页 |
| 3.3.1 诱饵质粒pGBKT7-N~(pro)和pGBKT7-NS3的构建 | 第36页 |
| 3.3.2 诱饵蛋白自激活与毒性检测 | 第36-37页 |
| 3.3.3 酵母双杂交阳性克隆的筛选 | 第37-38页 |
| 3.3.4 阳性克隆的PCR鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3.5 测序结果 | 第40-42页 |
| 3.3.6 功能分类和通路分析 | 第42-44页 |
| 3.3.7 构建N~(pro)/NS3与胞内蛋白相互作用的网络图 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 uS10与N~(pro)相互作用的验证及其对CSFV复制的影响 | 第49-71页 |
| 4.1 材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 细胞、质粒、菌株与毒株 | 第49-50页 |
| 4.1.2 主要试剂及其试剂盒 | 第50页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第50页 |
| 4.2 方法 | 第50-58页 |
| 4.2.1 载体的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀验证N~(pro)-uS10在细胞内的相互作用 | 第51-54页 |
| 4.2.3 GSTpull-down验证N~(pro)-uS10在体外的相互作用 | 第54页 |
| 4.2.4 敲低及过表达uS10的重组慢病毒包装与滴度测定 | 第54-55页 |
| 4.2.5 敲低及过表达uS10细胞系的构建与鉴定 | 第55-56页 |
| 4.2.6 敲低或过表达uS10对猪瘟病毒复制影响的检测 | 第56-57页 |
| 4.2.7 PAM细胞中过表达N~(pro)对uS10表达量的影响 | 第57页 |
| 4.2.8 CSFV感染PAM细胞后uS10表达变化的检测 | 第57页 |
| 4.2.9 uS10对TLR2、TLR3、TLR4和TLR7表达影响的检测 | 第57-58页 |
| 4.2.10 敲低uS10且过表达TLR3对猪瘟病毒复制的影响 | 第58页 |
| 4.2.11 过表达uS10且敲低TLR3对猪瘟病毒复制的影响 | 第58页 |
| 4.2.12 数据统计分析 | 第58页 |
| 4.3 结果 | 第58-68页 |
| 4.3.1 Co-IP验证N~(pro)与uS10的相互作用 | 第58-59页 |
| 4.3.2 GSTpull-down验证N~(pro)与uS10的相互作用 | 第59-60页 |
| 4.3.3 敲低uS10对猪瘟病毒复制的影响 | 第60-62页 |
| 4.3.4 过表达uS10对猪瘟病毒复制的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.5 外源表达N~(pro)及CSFV感染对细胞uS10表达水平的影响 | 第63-65页 |
| 4.3.6 uS10正向调控TLR3的表达水平 | 第65-66页 |
| 4.3.7 uS10通过促进TLR3表达抑制CSFV复制 | 第66-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-70页 |
| 4.5 小结 | 第70-71页 |
| 第五章 TRAF6与NS3相互作用的验证及其对CSFV复制的影响 | 第71-91页 |
| 5.1 材料 | 第71-72页 |
| 5.1.1 细胞、质粒、菌株与毒株 | 第71-72页 |
| 5.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第72页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第72页 |
| 5.2 方法 | 第72-77页 |
| 5.2.1 载体的构建及鉴定 | 第72-73页 |
| 5.2.2 免疫共沉淀验证NS3-TRAF6在细胞内的相互作用 | 第73-74页 |
| 5.2.3 GSTpull-down验证NS3-TRAF6在体外的相互作用 | 第74页 |
| 5.2.4 敲低及过表达TRAF6的重组慢病毒包装与滴度测定 | 第74页 |
| 5.2.5 敲低及过表达TRAF6细胞系的构建与鉴定 | 第74页 |
| 5.2.6 敲低或过表达TRAF6对猪瘟病毒复制影响的检测 | 第74页 |
| 5.2.7 PAM细胞中过表达NS3对TRAF6表达量的影响 | 第74-75页 |
| 5.2.8 PAM细胞中CSFV感染对TRAF6表达量的影响 | 第75页 |
| 5.2.9 TRAF6对下游NF-κB信号通路及效应因子影响的检测 | 第75-76页 |
| 5.2.10 NF-κB对CSFV复制影响的检测 | 第76-77页 |
| 5.2.11 抑制NF-κB激活时TRAF6对CSFV复制影响的检测 | 第77页 |
| 5.2.12 抑制NF-κB激活时TRAF6对IFN-β和IL-6表达水平影响的检测 | 第77页 |
| 5.2.13 数据统计分析 | 第77页 |
| 5.3 结果 | 第77-88页 |
| 5.3.1 Co-IP验证NS3与TRAF6的相互作用 | 第77-78页 |
| 5.3.2 GSTpull-down验证NS3与TRAF6的相互作用 | 第78-79页 |
| 5.3.3 敲低TRAF6对CSFV复制的影响 | 第79-81页 |
| 5.3.4 过表达TRAF6对CSFV复制的影响 | 第81-82页 |
| 5.3.5 外源表达NS3及CSFV感染对TRAF6表达的影响 | 第82-83页 |
| 5.3.6 TRAF6促进PAM细胞中NF-κB的激活及IFN-β和IL-6的表达 | 第83-85页 |
| 5.3.7 NF-κB的激活抑制CSFV的复制 | 第85-87页 |
| 5.3.8 TRAF6通过激活NF-κB信号通路抑制CSFV的复制 | 第87-88页 |
| 5.4 讨论 | 第88-90页 |
| 5.5 小结 | 第90-91页 |
| 结论 | 第91页 |
| 本文的创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 主要缩略词和中英文对照表(AbbreviationIndex) | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 作者简介 | 第109-110页 |
