| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 引言 | 第12-24页 |
| 0.1 禽流感概述 | 第12-15页 |
| 0.1.1 禽流感流行的历史和现状 | 第12-13页 |
| 0.1.2 禽流感病毒的生物学特征 | 第13-15页 |
| 0.2 NS1 蛋白的简介 | 第15-21页 |
| 0.2.1 N-末端RNA 结合结构域 | 第16-17页 |
| 0.2.2 C-末端效应结构域 | 第17-18页 |
| 0.2.3 NS1蛋白的功能 | 第18-20页 |
| 0.2.4 NS1蛋白与宿主细胞内的多种蛋白质相互作用 | 第20-21页 |
| 0.3 NOLC1 蛋白的简介 | 第21-22页 |
| 0.4 研究与NS1 互作蛋白的意义 | 第22-23页 |
| 0.5 本项目研究目的及内容 | 第23-24页 |
| 第1章 NS1 蛋白与 NOLC1 蛋白体外分子间相互作用验证 | 第24-37页 |
| 1.1 前言 | 第24-25页 |
| 1.2 材料 | 第25页 |
| 1.2.1 细胞株、载体、细菌菌株 | 第25页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.2.3 溶液配制（见附录A） | 第25页 |
| 1.2.4 主要仪器与耗材（见附录B） | 第25页 |
| 1.3 方法 | 第25-31页 |
| 1.3.1 NS1蛋白的原核表达及纯化 | 第25-28页 |
| 1.3.2 NOLC1 蛋白的真核表达及Western blot 分析 | 第28-31页 |
| 1.3.3 His-pull down 体外检测蛋白间相互作用 | 第31页 |
| 1.4 结果 | 第31-35页 |
| 1.4.1 NS1 蛋白诱导表达SDS-PAGE | 第31-32页 |
| 1.4.2 NS1 蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 1.4.3 NOLC1 蛋白含量的测定 | 第33-34页 |
| 1.4.4 NOLC1 蛋白的Western blot 分析 | 第34页 |
| 1.4.5 NS1蛋白与NOLC1蛋白体外相互作用的His-pull down 结果 | 第34-35页 |
| 1.5 讨论 | 第35-37页 |
| 第2章 NS1 蛋白与 NOLC1 蛋白的细胞共定位研究 | 第37-57页 |
| 2.1 前言 | 第37-38页 |
| 2.2 材料 | 第38页 |
| 2.2.1 引物合成 | 第38页 |
| 2.2.2 细胞株、载体、细菌菌株 | 第38页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第38页 |
| 2.2.4 溶液配制（见附录A） | 第38页 |
| 2.2.5 主要仪器与耗材（见附录B） | 第38页 |
| 2.3 方法 | 第38-47页 |
| 2.3.1 pEGFP-N1-NS1 真核表达载体的构建及表达 | 第38-42页 |
| 2.3.2 pDsRed-C1-NOLC1真核表达载体的构建及表达 | 第42-46页 |
| 2.3.3 NS1蛋白与NOLC1蛋白的细胞共定位研究 | 第46-47页 |
| 2.4 结果 | 第47-54页 |
| 2.4.1 NS1 基因的克隆 | 第47-48页 |
| 2.4.2 真核表达载体pEGFP-N1-NS1 的构建 | 第48-50页 |
| 2.4.3 pEGFP-N1-NS1 真核表达载体在Hela 细胞中的表达 | 第50页 |
| 2.4.4 NOLC1基因的克隆 | 第50-51页 |
| 2.4.5 真核表达载体pDsRed-C1-NOLC1的构建 | 第51-53页 |
| 2.4.6 pDsRed-C1-NOLC1 真核表达载体在Hela 细胞中的表达 | 第53页 |
| 2.4.7 NS1 蛋白与NOLC1 蛋白的细胞共定位研究 | 第53-54页 |
| 2.5 讨论 | 第54-57页 |
| 第3章 基因截短确定 NS1蛋白与 NOLC1蛋白相互作用结构域 | 第57-71页 |
| 3.1 前言 | 第57页 |
| 3.2 材料 | 第57-58页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第57页 |
| 3.2.2 细胞株、载体、细菌菌株 | 第57页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第57-58页 |
| 3.2.4 溶液配制（见附录A） | 第58页 |
| 3.2.5 主要仪器与耗材（见附录B） | 第58页 |
| 3.3 方法 | 第58-63页 |
| 3.3.1 NS1 截短表达质粒pEGFP-N1-NS1(RBD)、pEGFP-N1-NS1(ED)构建及表达 | 第58-62页 |
| 3.3.2 NOLC1 蛋白的真核表达及Western blot 分析（同1.3.2） | 第62页 |
| 3.3.3 免疫共沉淀确定NS1 蛋白与NOLC1 蛋白相互作用的结构域 | 第62-63页 |
| 3.4 结果 | 第63-69页 |
| 3.4.1 NS1 截短体基因的克隆 | 第63-64页 |
| 3.4.2 NS1 截短表达质粒pEGFP-N1-NS1(RBD)、pEGFP-N1-NS1(ED)构建 | 第64-66页 |
| 3.4.3 pEGFP-N1-NS1(RBD)、pEGFP-N1-NS1(ED)真核表达载体在293T 细胞中表达 | 第66-67页 |
| 3.4.4 免疫共沉淀确定NS1蛋白与NOLC1蛋白相互作用的结构域 | 第67-69页 |
| 3.5 讨论 | 第69-71页 |
| 第4章 结论与展望 | 第71-72页 |
| 4.1 结论 | 第71页 |
| 4.2 进一步工作的方向 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 A 试剂及其配制一览表 | 第79-82页 |
| 附录 B 主要仪器与耗材一览表 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第83-84页 |
