| 论文创新点 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 丙型肝炎病毒的分子生物学 | 第14-31页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 HCV的治疗 | 第15-16页 |
| 1.3 HCV病毒的理化特性 | 第16-17页 |
| 1.4 HCV的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.5 HCV的复制周期 | 第18-19页 |
| 1.6 HCV病毒基因组编码蛋白 | 第19-31页 |
| 1.6.1 Core蛋白 | 第19-20页 |
| 1.6.2 E1蛋白 | 第20-21页 |
| 1.6.3 E2蛋白 | 第21页 |
| 1.6.4 P7蛋白 | 第21页 |
| 1.6.5 NS2 | 第21-22页 |
| 1.6.6 NS3 | 第22-23页 |
| 1.6.7 NS4A | 第23页 |
| 1.6.8 NS4B | 第23-26页 |
| 1.6.9 NS5A | 第26-29页 |
| 1.6.10 NS5B蛋白 | 第29-31页 |
| 第二章 PKC/ERK/JNK激酶 | 第31-35页 |
| 2.1 PKC激酶 | 第31-32页 |
| 2.2 ERK和JNK激酶 | 第32-35页 |
| 第三章 STAT3,SOCS3,MMP-2,BCL-2细胞因子的介绍 | 第35-39页 |
| 3.1 STAT3 | 第35-36页 |
| 3.2 SOCS3 | 第36-37页 |
| 3.3 MMPs | 第37-38页 |
| 3.4 Bcl-2 | 第38-39页 |
| 第四章 HCV通过JNK和ERK信号级联激活STAT3的活性,上调下游蛋白MMP-2和Bcl-2的表达 | 第39-50页 |
| 4.1 前言 | 第39页 |
| 4.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.2.1 病毒及细胞系 | 第39页 |
| 4.2.2 细胞培养基 | 第39-40页 |
| 4.2.3 检测引物与抗体 | 第40页 |
| 4.2.4 试验仪器 | 第40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 4.3.1 分离PBMC(外周血淋巴单个核细胞) | 第40-41页 |
| 4.3.2 Nest-PCR(巢式PCR) | 第41-42页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR | 第42页 |
| 4.3.4 细胞培养 | 第42-43页 |
| 4.3.5 病毒扩增 | 第43-44页 |
| 4.3.6 蛋白质免疫印迹法(Western Blot) | 第44-46页 |
| 4.3.7 洗膜 | 第46页 |
| 4.4 实验结果 | 第46-49页 |
| 4.4.1 HCV病人的PBMC中STAT3表达水平 | 第46-48页 |
| 4.4.2 JFH-1病毒感染Huh7.5.1细胞的研究 | 第48-49页 |
| 4.5 讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 NS4B蛋白调控STAT3信号通路的研究 | 第50-66页 |
| 5.1 前言 | 第50页 |
| 5.2 实验材料 | 第50-51页 |
| 5.2.1 菌种和JFH-1模板质粒 | 第50页 |
| 5.2.2 抑制剂和干扰RNA | 第50-51页 |
| 5.2.3 其它质粒 | 第51页 |
| 5.2.4 试验仪器 | 第51页 |
| 5.3 实验方法 | 第51-58页 |
| 5.3.1 以JFH-1病毒上清为模板扩增HCV 2a亚型所有编码基因 | 第51-52页 |
| 5.3.2 PCR产物的EB凝胶电泳检测和回收 | 第52页 |
| 5.3.3 PCR片段和质粒载体的限制性双酶切和片段回收 | 第52页 |
| 5.3.4 目的基因片段与载体的连接 | 第52-53页 |
| 5.3.5 连接产物的转化 | 第53-54页 |
| 5.3.6 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第54页 |
| 5.3.7 质粒DNA提取 | 第54-55页 |
| 5.3.8 重组质粒的酶切鉴定和测序 | 第55页 |
| 5.3.9 细胞转染用的高纯质粒浓度的测定 | 第55页 |
| 5.3.10 细胞转染 | 第55-56页 |
| 5.3.11 荧光素酶Luciferase活性的测定 | 第56页 |
| 5.3.12 MMP Zymography明胶酶实验 | 第56-57页 |
| 5.3.13 提细胞核抽提物 | 第57页 |
| 5.3.14 免疫荧光FITC实验 | 第57-58页 |
| 5.4 实验结果 | 第58-64页 |
| 5.4.1 HCV的十个基因质粒表达载体的构建和功能性的筛选 | 第58-59页 |
| 5.4.2 NS4B过表达能增强STAT3的磷酸化水平 | 第59-60页 |
| 5.4.3 STAT3的干扰RNA能抑制MMP-2和Bcl-2的表达 | 第60-61页 |
| 5.4.4 SOCS3的干扰RNA能促进MMP-2和Bcl-2的表达 | 第61-62页 |
| 5.4.5 ERK和JNK在NS4B调控STAT3信号通路起重要作用 | 第62-63页 |
| 5.4.6 PKC家族激酶参与到NS4B调控STAT3通路的过程中 | 第63-64页 |
| 5.5 讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 PKC,ERK,JNK在调控STAT3通路的上下游关系和协同效应的初步探讨 | 第66-69页 |
| 6.1 前言 | 第66页 |
| 6.2 实验材料和仪器 | 第66页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第66页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第66页 |
| 6.3 实验方法 | 第66页 |
| 6.4 实验结果 | 第66-68页 |
| 6.5 讨论 | 第68-69页 |
| 第七章 NS4B蛋白C末端结构域功能的研究 | 第69-77页 |
| 7.1 前言 | 第69页 |
| 7.2 实验材料和仪器 | 第69页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第69页 |
| 7.2.2 实验仪器 | 第69页 |
| 7.3 实验方法 | 第69-70页 |
| 7.3.1 NS4B蛋白的截短和点突变表达质粒的构建 | 第69-70页 |
| 7.4 实验结果 | 第70-74页 |
| 7.4.1 NS4B蛋白的截短 | 第70-72页 |
| 7.4.2 NS4B蛋白的定点突变 | 第72-74页 |
| 7.5 讨论 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-96页 |
| 附录Ⅰ 论文中所用引物 | 第96-98页 |
| 附录Ⅱ 博士在读期间已发表的文章 | 第98-99页 |
| 附录Ⅲ 研究生期间参加的学术会议交流 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
