| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-36页 |
| 1.1 甜菜素及其生物学功能 | 第13-18页 |
| 1.1.1 甜菜素的来源 | 第13-16页 |
| 1.1.2 甜菜素的化学结构 | 第16页 |
| 1.1.3 甜菜素的物理化学性质 | 第16-17页 |
| 1.1.4 甜菜素的生理功能 | 第17-18页 |
| 1.1.5 甜菜素的应用 | 第18页 |
| 1.2 推导的植物体内甜菜素生物合成途径 | 第18-21页 |
| 1.2.1 甜菜醛氨酸的生物合成 | 第20页 |
| 1.2.2 甜菜黄素的生物合成 | 第20页 |
| 1.2.3 甜菜红素的生物合成 | 第20-21页 |
| 1.3 参与甜菜素生物合成途径的关键酶 | 第21-30页 |
| 1.3.1 酪氨酸酶的研究进展 | 第21-28页 |
| 1.3.2 4,5-多巴雌二醇双加氧酶的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.3.3 新型细胞色素P450酶的研究进展 | 第29-30页 |
| 1.4 过氧化氢酶的研究进展 | 第30-35页 |
| 1.4.1 分类 | 第30-31页 |
| 1.4.2 活性中心和定位信号 | 第31-32页 |
| 1.4.3 作用机制 | 第32-34页 |
| 1.4.4 理化性质 | 第34页 |
| 1.4.5 生理功能 | 第34-35页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-62页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-40页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 2.1.2 植物培养材料 | 第36页 |
| 2.1.3 载体与菌株 | 第36页 |
| 2.1.4 主要试剂及耗材 | 第36-37页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第37-40页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-62页 |
| 2.2.1 红苋菜叶片中具有酪氨酸酶活性的酶的分离纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.2 蛋白质浓度的测定 | 第41页 |
| 2.2.3 纯化的酶的单酚酶活性测定 | 第41-43页 |
| 2.2.4 纯化的酶的双酚酶活性测定 | 第43-44页 |
| 2.2.5 电泳检测与染色分析 | 第44-45页 |
| 2.2.6 Nano-LC-MS/MS测定纯化的酶的氨基酸序列 | 第45-46页 |
| 2.2.7 纯化的酶的过氧化氢酶活性测定 | 第46-48页 |
| 2.2.8 TRIzol法提取植物叶片组织的总RNA | 第48-49页 |
| 2.2.9 总RNA反转录成cDNA | 第49-50页 |
| 2.2.10 过氧化氢酶cDNA中间片段的克隆 | 第50-51页 |
| 2.2.11 过氧化氢酶cDNA3'末端的克隆 | 第51-52页 |
| 2.2.12 过氧化氢酶cDNA 5末端的克隆 | 第52-54页 |
| 2.2.13 过氧化氢酶cDNA完整CDS的克隆 | 第54-55页 |
| 2.2.14 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第55页 |
| 2.2.15 转化菌落的鉴定 | 第55页 |
| 2.2.16 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第55-56页 |
| 2.2.17 质粒DNA的酶切鉴定 | 第56页 |
| 2.2.18 AcCATPO的系统进化分析 | 第56-57页 |
| 2.2.19 普通苋菜叶片中甜菜素色素的提取与分析 | 第57页 |
| 2.2.20 AcCATPO的qRT-PCR分析 | 第57-59页 |
| 2.2.21 重组表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 2.2.22 AcCATPO在大肠杆菌中的表达 | 第60-62页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第62-100页 |
| 3.1 红苋菜叶片中具有酪氨酸酶活性的酶的纯化 | 第62-66页 |
| 3.1.1 红苋菜叶片中纯化的酶的分子量及纯度的确定 | 第62-64页 |
| 3.1.2 蛋白质含量标准曲线的确定 | 第64页 |
| 3.1.3 红苋菜叶片中AcCATPO的纯化情况 | 第64-66页 |
| 3.2 纯化的酶的单酚酶活性分析 | 第66-69页 |
| 3.2.1 L-DOPA在单酚酶活性分析中的作用 | 第66页 |
| 3.2.2 温度对单酚酶活性的影响 | 第66页 |
| 3.2.3 pH对单酚酶活性的影响 | 第66-67页 |
| 3.2.4 底物L-酪氨酸的浓度对单酚酶活性的影响 | 第67页 |
| 3.2.5 常见的酪氨酸酶抑制剂对单酚酶活性的影响 | 第67-69页 |
| 3.3 纯化的酶的双酚酶活性分析 | 第69-72页 |
| 3.3.1 温度对双酚酶活性的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.2 pH对双酚酶活性的影响 | 第70页 |
| 3.3.3 底物L-DOPA的浓度对双酚酶活性的影响 | 第70页 |
| 3.3.4 常见的酪氨酸酶抑制剂对双酚酶活性的影响 | 第70-72页 |
| 3.4 纯化的酶的nano-LC-MS/MS分析 | 第72-77页 |
| 3.5 纯化的酶的过氧化氢酶活性分析 | 第77-79页 |
| 3.5.1 过氧化氢酶活性的催化分析 | 第77页 |
| 3.5.2 过氧化氢酶活性的抑制分析 | 第77-79页 |
| 3.6 纯化的酶的编码基因的克隆 | 第79-86页 |
| 3.6.1 中间片段的克隆 | 第79-81页 |
| 3.6.2 3'末端的克隆 | 第81-82页 |
| 3.6.3 5'末端的克隆 | 第82-84页 |
| 3.6.4 完整CDS的克隆 | 第84-86页 |
| 3.7 克隆基因的序列分析 | 第86-90页 |
| 3.7.1 同源性的分析 | 第86页 |
| 3.7.2 目标肽段的分析 | 第86页 |
| 3.7.3 定位信号和活性中心的分析 | 第86-90页 |
| 3.8 植物过氧化氢酶中活性中心、定位信号和系统进化分析 | 第90-93页 |
| 3.8.1 活性中心的分析 | 第90页 |
| 3.8.2 定位信号的分析 | 第90-91页 |
| 3.8.3 系统进化分析 | 第91-93页 |
| 3.9 AcCATPO与甜菜素生物合成途径 | 第93-95页 |
| 3.10 AcCATPO的其他生物信息学分析 | 第95-97页 |
| 3.10.1 序列组分属性和等电点的分析 | 第95-96页 |
| 3.10.2 信号肽预测 | 第96页 |
| 3.10.3 同源模拟AcCATPO的三维结构 | 第96-97页 |
| 3.11 AcCATPO在大肠杆菌中的表达 | 第97-100页 |
| 3.11.1 重组表达载体的构建和鉴定 | 第97-98页 |
| 3.11.2 AcCATPO在大肠杆菌中的表达分析 | 第98-100页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第100-106页 |
| 4.1 讨论 | 第100-104页 |
| 4.2 小结 | 第104页 |
| 4.3 结论 | 第104页 |
| 4.4 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 附录 | 第120-130页 |
| S1 纯化的酶体外催化L-酪氨酸可能的反应机制 | 第120-121页 |
| S2 纯化的酶的过氧化氢酶活性的部分鉴定 | 第121-123页 |
| S3 红苋菜总RNA的提取及纯化的酶cDNA编码的氨基酸序列的比对分析 | 第123-125页 |
| S4 补充材料 | 第125-130页 |
| 作者简历 | 第130页 |
