| 内容提要 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 第一篇 文献综述 | 第21-41页 |
| 第1章 BMSC研究进展 | 第21-31页 |
| 1.1 pBMSC分离、培养及鉴定 | 第21-25页 |
| 1.1.1 pBMSC特征 | 第21-22页 |
| 1.1.2 pBMSC分离培养及鉴定 | 第22-23页 |
| 1.1.3 pBMSC培养体系优化 | 第23-24页 |
| 1.1.4 小分子化合物在BMSC体外长期培养中的作用 | 第24-25页 |
| 1.2 pBMSC定向分化 | 第25-27页 |
| 1.2.1 pBMSC外胚层分化 | 第25-26页 |
| 1.2.2 pBMSC中胚层分化 | 第26-27页 |
| 1.2.3 pBMSC内胚层分化 | 第27页 |
| 1.3 pBMSC临床应用及局限性 | 第27-31页 |
| 1.3.1 应用 | 第28-29页 |
| 1.3.2 MSC的免疫原性和免疫调节特点 | 第29-30页 |
| 1.3.3 局限性 | 第30页 |
| 1.3.4 未来展望 | 第30-31页 |
| 第2章 诱导多能性干细胞研究进展 | 第31-35页 |
| 2.1 iPS诱导过程中的表观遗传重编程 | 第31-33页 |
| 2.1.1 重编程过程中的DNA甲基化 | 第31-32页 |
| 2.1.2 小分子化合物对重编程的作用 | 第32-33页 |
| 2.2 猪i PS简介 | 第33-35页 |
| 第3章 miRNA在间充质干细胞定向分化中的作用 | 第35-41页 |
| 3.1 miRNA简介 | 第35页 |
| 3.2 miRNA作用机制 | 第35-36页 |
| 3.3 miRNA在干细胞中表达 | 第36-38页 |
| 3.4 miRNA诱导pBMSC定向分化 | 第38-41页 |
| 3.4.1 miRNA在pBMSC诱导成脂分化中的作用 | 第38-39页 |
| 3.4.2 miRNA在诱导pBMSC成胰岛素分泌细胞中的作用 | 第39-41页 |
| 第二篇 实验研究 | 第41-101页 |
| 第1章 pBMSC原代分离、鉴定及培养体系的优化 | 第41-69页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第41-44页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第41页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第41-42页 |
| 1.1.3 主要耗材 | 第42页 |
| 1.1.4 主要试剂及配制方法 | 第42-44页 |
| 1.2 实验方法 | 第44-53页 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞原代分离和培养 | 第44-46页 |
| 1.2.2 细胞表面标记物的检测 | 第46页 |
| 1.2.3 细胞增殖曲线检测 | 第46页 |
| 1.2.4 细胞凋亡检测 | 第46-47页 |
| 1.2.5 细胞总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 1.2.6 RNA反转录成c DNA | 第48页 |
| 1.2.7 引物的设计与合成 | 第48页 |
| 1.2.8 目的片段的扩增 | 第48-49页 |
| 1.2.9 pBMSCs体外分化方法 | 第49-51页 |
| 1.2.10 亚硫酸氢盐转化及DNA测序（BSP） | 第51-52页 |
| 1.2.11 免疫荧光染色 | 第52-53页 |
| 1.2.12 数据统计学分析 | 第53页 |
| 1.3 结果 | 第53-66页 |
| 1.3.1 pBMSC原代培养 | 第53-54页 |
| 1.3.2 pBMSC细胞增殖曲线 | 第54页 |
| 1.3.3 pBMSC细胞表面标记检测 | 第54-55页 |
| 1.3.4 pBMSC分化潜能验证 | 第55-56页 |
| 1.3.5 培养体系中添加TGF-β 信号通路抑制剂—A83-01 | 第56-60页 |
| 1.3.6 培养体系中添加DNA甲基转移酶Ⅰ抑制剂—RG108 | 第60-66页 |
| 1.4 讨论 | 第66-68页 |
| 1.5 小结 | 第68-69页 |
| 第2章 pBMSC诱导i PS及其鉴定 | 第69-87页 |
| 2.1 材料试剂 | 第69-71页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第69页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第69-70页 |
| 2.1.3 主要耗材 | 第70页 |
| 2.1.4 主要试剂及配制方法 | 第70-71页 |
| 2.2 实验方法 | 第71-76页 |
| 2.2.1 原代小鼠成纤维细胞的制备 | 第71页 |
| 2.2.2 饲养层细胞的制备和使用 | 第71-72页 |
| 2.2.3 慢病毒诱导质粒准备 | 第72页 |
| 2.2.4 慢病毒制备 | 第72-73页 |
| 2.2.5 病毒滴度检测 | 第73页 |
| 2.2.6 猪i PS诱导 | 第73页 |
| 2.2.7 猪i PS传代培养、冻存及复苏 | 第73-74页 |
| 2.2.8 猪i PS多能性的鉴定 | 第74-75页 |
| 2.2.9 培养液中添加A83-01 和RG108对i PS诱导效率影响 | 第75页 |
| 2.2.10 培养液中添加A83-01 和RG108对i PS诱导过程中多能性基因表达影响 | 第75-76页 |
| 2.2.11 培养液中添加RG108对i PS诱导过程中多能性基因启动子区域DNA甲基化水平影响 | 第76页 |
| 2.2.12 统计学分析方法 | 第76页 |
| 2.3 结果 | 第76-83页 |
| 2.3.1 慢病毒包装及侵染 | 第76-77页 |
| 2.3.2 pBMSC向i PS诱导过程中的形态学变化 | 第77页 |
| 2.3.3 iPS多潜能性验证 | 第77-80页 |
| 2.3.4 培养液中添加A83-01 和RG108对i PS诱导效率影响 | 第80页 |
| 2.3.5 培养液中添加A83-01 和RG108对i PS诱导过程中多能性基因表达影响 | 第80-81页 |
| 2.3.6 培养液中添加RG108对i PS诱导过程中多能性基因启动子区域DNA甲基化水平影响 | 第81-83页 |
| 2.4 讨论 | 第83-84页 |
| 2.5 小结 | 第84-87页 |
| 第3章 miRNA诱导pBMSC定向分化为脂肪细胞和胰岛素分泌细胞的研究 | 第87-101页 |
| 3.1 材料试剂 | 第87-88页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第87页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第87页 |
| 3.1.3 主要耗材 | 第87-88页 |
| 3.1.4 主要试剂及配制方法 | 第88页 |
| 3.2 实验方法 | 第88-91页 |
| 3.2.1 BMSC定向成脂分化相关micro RNA mimics合成 | 第88-89页 |
| 3.2.2 BMSC定向分化为胰岛素分泌细胞相关miRNA慢病毒载体构建 | 第89页 |
| 3.2.3 miRNA诱导BMSC成脂分化 | 第89页 |
| 3.2.4 慢病毒载体病毒包装 | 第89页 |
| 3.2.5 病毒滴度检测 | 第89页 |
| 3.2.6 miRNA诱导分化为胰岛素分泌细胞 | 第89-90页 |
| 3.2.7 双硫腙染色 | 第90页 |
| 3.2.8 胰岛素分泌细胞糖刺激实验 | 第90页 |
| 3.2.9 EILSA检测 | 第90-91页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第91页 |
| 3.3 结果 | 第91-98页 |
| 3.3.1 miRNA在成脂分化诱导过程中的作用 | 第91-95页 |
| 3.3.2 miRNA在pBMSC向胰岛素分泌细胞分化过程中的作用 | 第95-98页 |
| 3.4 讨论 | 第98-100页 |
| 3.5 小结 | 第100-101页 |
| 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
| 附录 | 第119-121页 |
| 导师简介 | 第121-125页 |
| 作者简介 | 第125-126页 |
| 攻读博士期间发表论文情况 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
