| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第13-34页 |
| 1.1 酶的非特异性催化 | 第13-14页 |
| 1.2 酶非特异性催化的产生 | 第14-17页 |
| 1.2.1 趋异进化产生的非特异性催化 | 第15页 |
| 1.2.2 人工修饰酶非特异性催化的产生 | 第15-17页 |
| 1.3 酶的非特异性催化在有机合成中的应用 | 第17-20页 |
| 1.3.1 脂肪酶的非特异性催化在有机合成反应中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3.2 蛋白酶的非特异性催化在有机合成反应中的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 酯酶的非特异性催化在有机合成反应中的应用 | 第20页 |
| 1.4 酶非特异性催化的几种主要反应类型 | 第20-25页 |
| 1.4.1 Aldol加成反应 | 第21-22页 |
| 1.4.2 Micheal加成反应 | 第22-23页 |
| 1.4.3 Knoevenagel缩合反应 | 第23-25页 |
| 1.4.4 Baylis-Hillman加成反应 | 第25页 |
| 1.5 非水介质中酶的非特异性催化 | 第25页 |
| 1.6 α/β 水解酶的非特异性催化 | 第25-26页 |
| 1.7 水解酶催化的立体以及对映体选择性 | 第26-28页 |
| 1.7.1 机械拆分法 | 第27页 |
| 1.7.2 晶体接种拆分法 | 第27页 |
| 1.7.3 化学拆分法 | 第27页 |
| 1.7.4 色谱拆分法 | 第27页 |
| 1.7.5 酶促拆分法 | 第27-28页 |
| 1.8 影响酶非特异性催化反应的因素 | 第28-30页 |
| 1.8.1 有机溶剂对酶催化反应的影响 | 第28-29页 |
| 1.8.2 温度对酶催化反应的影响 | 第29页 |
| 1.8.3 水分含量对酶催化反应的影响 | 第29-30页 |
| 1.9 酶的非特异性催化Henry加成反应 | 第30-33页 |
| 1.9.1 化学合成法的局限性 | 第31-32页 |
| 1.9.2 酶的非特异性催化Henry加成反应 | 第32-33页 |
| 1.10 本文的研究思路及主要内容 | 第33-34页 |
| 第二章 多种来源的酶催化的C-C加成反应的研究 | 第34-42页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 材料和方法 | 第34-36页 |
| 2.2.1 实验仪器与材料 | 第34-35页 |
| 2.2.2 酶催化Aldol加成反应 | 第35页 |
| 2.2.3 酶催化Henry加成反应 | 第35-36页 |
| 2.2.4 反应产物的分离与鉴定 | 第36页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第36-41页 |
| 2.3.1 合成化合物的表征 | 第36-38页 |
| 2.3.2 多种酶催化的Aldol加成反应 | 第38-40页 |
| 2.3.3 多种酶催化的Henry加成反应 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 Tnap0664催化Aldol反应的条件优化 | 第42-47页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料和方法 | 第42-43页 |
| 3.2.1 实验仪器与材料 | 第42页 |
| 3.2.2 酶催化Aldol加成反应 | 第42-43页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第43-45页 |
| 3.3.1 温度对酶催化Aldol加成反应的影响 | 第43页 |
| 3.3.2 水含量对酶催化Aldol加成反应的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3 反应时间对酶催化Aldol加成反应的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.4 Tnap0664催化Aldol加成反应的动力学参数的测定 | 第45页 |
| 3.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第四章 ST0779催化Henry加成反应条件的优化 | 第47-56页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 材料和方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 实验仪器与材料 | 第47页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第49-55页 |
| 4.3.1 不同有机溶剂对酶催化Henry加成反应的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.2 不同温度对酶催化Henry加成反应的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.3 水含量对酶催化Henry加成反应的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.4 底物摩尔比对酶催化Henry加成反应的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.5 反应时间对酶催化Henry加成反应的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.6 反应动力学参数的测定 | 第54-55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第五章 ST0779催化多样性的研究 | 第56-63页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 材料和方法 | 第56-57页 |
| 5.2.1 实验仪器与材料 | 第56页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第57-62页 |
| 5.3.1 不同取代基团对酶非特异性催化Henry反应的影响 | 第57-60页 |
| 5.3.2 表观速率常数的测定 | 第60-61页 |
| 5.3.3 哈米特方程 | 第61-62页 |
| 5.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 第六章 嗜热酰基氨肽酶ST0779突变体的构建及表达 | 第63-75页 |
| 6.1 引言 | 第63页 |
| 6.2 实验仪器与材料 | 第63-64页 |
| 6.2.1 实验仪器 | 第63页 |
| 6.2.2 实验材料 | 第63-64页 |
| 6.3 实验方法 | 第64-67页 |
| 6.3.1 引物设计 | 第64-65页 |
| 6.3.2 全质粒PCR | 第65-66页 |
| 6.3.3 突变重组质粒的转化及鉴定 | 第66页 |
| 6.3.4 目的蛋白的诱导表达 | 第66-67页 |
| 6.3.5 目的蛋白的纯化 | 第67页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第67-74页 |
| 6.4.1 突变体S439A，D523A，H555A，R525E及R525V的全质粒PCR | 第67-68页 |
| 6.4.2 全质粒PCR产物的DpnⅠ消化，转化及质粒提取 | 第68-69页 |
| 6.4.3 突变重组质粒的测序 | 第69-71页 |
| 6.4.4 目的蛋白的诱导表达 | 第71-73页 |
| 6.4.5 目的蛋白的纯化 | 第73-74页 |
| 6.5 小结 | 第74-75页 |
| 第七章 ST0779突变体的催化性质研究 | 第75-82页 |
| 7.1 引言 | 第75页 |
| 7.2 材料和方法 | 第75-76页 |
| 7.2.1 实验仪器与材料 | 第75页 |
| 7.2.2 肽酶活力测定 | 第75-76页 |
| 7.2.3 酯酶活力测定 | 第76页 |
| 7.2.4 ST0779突变体催化Henry加成反应 | 第76页 |
| 7.2.5 Henry加成反应产物的分离与鉴定 | 第76页 |
| 7.3 实验结果与讨论 | 第76-81页 |
| 7.3.1 合成化合物的表征 | 第76-77页 |
| 7.3.2 ST0779突变体肽酶和酯酶活力的测定 | 第77-78页 |
| 7.3.3 ST0779突变体催化Henry加成反应 | 第78-81页 |
| 7.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-98页 |
| 附录 | 第98-112页 |
| 作者简介及科研成果 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
