| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 抗生素的发展历史 | 第12-13页 |
| 1.2 抗生素的种类 | 第13页 |
| 1.3 抗生素抗性机制的阐明 | 第13-14页 |
| 1.4 抗生素抗性的产生与传播迁移 | 第14-16页 |
| 1.5 细菌耐药性的检测方法的阐述 | 第16-17页 |
| 1.6 抗生素残留对环境的影响 | 第17-18页 |
| 1.7 环境中抗生素耐药基因的研究现状 | 第18-22页 |
| 1.8 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 多重耐药质粒pYN1能否在不同细菌种属之间自然转化的研究 | 第24-36页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 材料和方法 | 第24-31页 |
| 2.2.1 药品 | 第24-25页 |
| 2.2.2 培养基 | 第25页 |
| 2.2.3 抗生素储备液的制备 | 第25页 |
| 2.2.4 抗生素抗性平板的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.6 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.2.7 多抗性菌株的活化 | 第27页 |
| 2.2.8 多抗性菌的总质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.9 提取的总质粒与受体菌静置共培养 | 第28页 |
| 2.2.10 转化子验证并计数 | 第28-30页 |
| 2.2.11 技术路线 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.3.1 受体菌生长曲线、抗生素MIC值测定以及转化效率的测定 | 第31-33页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.3.3 转化子验证 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 添加不同抗生素对于多重耐药质粒pYN1在不同细菌种属之间自然转化的影响的研究 | 第36-48页 |
| 3.1 前言 | 第36页 |
| 3.2 材料和方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 药品及试剂 | 第37页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第37页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.4 培养基 | 第38页 |
| 3.2.5 实验技术路线 | 第38-39页 |
| 3.2.6 转化子计数 | 第39页 |
| 3.2.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第39-40页 |
| 3.2.8 高效液相对于菌体全蛋白的表达检测 | 第40页 |
| 3.3 结果和分析 | 第40-47页 |
| 3.3.1 不同头孢氨苄浓度对多抗性质粒转化效率的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.2 不同四环素浓度对多抗性质粒转化效率的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.3 不同卡那霉素对多抗性质粒转化效率的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.4 不同抗生素对枯草芽孢杆菌生长状态及蛋白表达量的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 不同抗生素对变形杆菌生长状态及蛋白表达量的影响 | 第44页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE检测不同处理状态下枯草芽孢杆菌全蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 3.3.7 高效液相对于不同处理条件下菌体全蛋白的表达检测 | 第45-47页 |
| 3.4 小结 | 第47-48页 |
| 第四章 添加不同重金属对于多重质粒pYN1在不同细菌种属之间自然转化的影响的研究 | 第48-64页 |
| 4.1 前言 | 第48-50页 |
| 4.2 材料和方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 材料 | 第50页 |
| 4.2.2 化学试剂 | 第50页 |
| 4.2.3 培养基 | 第50-51页 |
| 4.2.4 常用实验仪器 | 第51页 |
| 4.2.5 实验技术路线 | 第51-52页 |
| 4.2.6 转化子计数 | 第52页 |
| 4.2.7 SDS-PAGE检测不同处理状态下枯草芽孢杆菌全蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 4.2.8 高效液相 | 第53页 |
| 4.3 结果和分析 | 第53-61页 |
| 4.3.1 受体菌对重金属最小抑菌浓度 | 第53-54页 |
| 4.3.2 不同铜离子浓度对多抗性质粒转化效率的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.3 不同锰离子浓度对多抗性质粒转化效率的影响 | 第55页 |
| 4.3.4 不同锌离子浓度对多抗性质粒转化效率的影响 | 第55-57页 |
| 4.3.5 不同铁离子浓度对多抗性质粒转化效率的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.6 不同重金属对枯草芽孢杆菌生长状态以及蛋白表达量的影响 | 第58页 |
| 4.3.7 不同重金属对变形杆菌生长状态以及蛋白表达量的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.8 SDS-PAGE检测不同处理状态下枯草芽孢杆菌全蛋白的表达 | 第59页 |
| 4.3.9 高效液相对于不同重金属处理条件下菌体全蛋白的表达检测 | 第59-61页 |
| 4.4 小结 | 第61-64页 |
| 第五章 GFP标记多重耐药质粒pYN1 | 第64-76页 |
| 5.1 前言 | 第64-65页 |
| 5.2 材料和方法 | 第65-72页 |
| 5.2.1 材料 | 第65-66页 |
| 5.2.2 化学试剂 | 第66-67页 |
| 5.2.3 培养基 | 第67页 |
| 5.2.4 常用实验仪器 | 第67页 |
| 5.2.5 实验技术路线 | 第67页 |
| 5.2.6 GFP基因的克隆 | 第67-69页 |
| 5.2.7 质粒pYN1的提取 | 第69-70页 |
| 5.2.8 大肠杆菌DH5α 感受态制备 | 第70-71页 |
| 5.2.9 热击法转化大肠杆菌感受态细胞 | 第71页 |
| 5.2.10 质粒pYN2的构建 | 第71-72页 |
| 5.3 结果和分析 | 第72-74页 |
| 5.3.1 转化子的平板验证与荧光显微镜检测 | 第72-73页 |
| 5.3.2 转化子的稳定性检测 | 第73-74页 |
| 5.3.3 GFP验证 | 第74页 |
| 5.4 小结 | 第74-76页 |
| 第六章 结论与展望 | 第76-78页 |
| 6.1 结论 | 第76页 |
| 6.2 展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第88-89页 |
