| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-30页 |
| 1.1 前言 | 第15页 |
| 1.2 TCR的结构及多样性 | 第15-18页 |
| 1.3 高变区与抗原识别 | 第18-20页 |
| 1.4 TCR偏向性与疾病 | 第20-26页 |
| 1.4.1 肿瘤抗原 | 第23-24页 |
| 1.4.2 病原感染 | 第24-25页 |
| 1.4.2.1 病毒感染 | 第24-25页 |
| 1.4.2.2 肺结核 | 第25页 |
| 1.4.2.3 疟疾 | 第25页 |
| 1.4.3 自身免疫病 | 第25-26页 |
| 1.5 抗原特异的TCR基因转导 | 第26-28页 |
| 1.6 猪T细胞受体研究的意义 | 第28-30页 |
| 第二章 猪CD4~+和CD8~+ T细胞TCR α、β 链CDR3的多样性 | 第30-46页 |
| 2.1 材料和方法 | 第30-34页 |
| 2.1.1 实验动物及试剂 | 第30页 |
| 2.1.2 引物的设计与合成 | 第30-33页 |
| 2.1.3 猪外周血单个核细胞（PBMCs）的分离 | 第33页 |
| 2.1.4 猪外周血CD4~+和CD8~+ T细胞的分离 | 第33页 |
| 2.1.5 总RNA的提取及反转录 | 第33页 |
| 2.1.6 TCR α 和 β 链cDNA浓度标准化 | 第33页 |
| 2.1.7 TCR Vα 和Vβ 链家族的RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.1.8 猪TCR α 链和 β 链的CDR3区基因扫描分析 | 第34页 |
| 2.1.9 TCR AV和BV基因家族CDR3区测序 | 第34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-43页 |
| 2.2.1 猪CD4~+和CD8~+ T细胞TRAV和TRBV家族RT-PCR扩增结果 | 第34-36页 |
| 2.2.2 猪CD4~+和CD8~+ T细胞TCR Vα 和Vβ 链CDR3区基因扫描图谱分析 | 第36-37页 |
| 2.2.3 猪CD4~+和CD8~+ T细胞TCR Vα、Vβ 链各家族CDR3序列长度分析结果 | 第37-42页 |
| 2.2.4 猪 CD4~+和 CD8~+ T 细胞 TCR Vα、Vβ 链 CDR3 区的表达频率 | 第42-43页 |
| 2.3 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 猪瘟C株疫苗免疫后猪CD4~+ T细胞 αβTCR克隆化扩增动态 | 第46-60页 |
| 3.1 材料和方法 | 第46-48页 |
| 3.1.1 实验动物及试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.1.1 实验动物 | 第46页 |
| 3.1.1.2 试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.2 毒株 | 第47页 |
| 3.1.3 引物的设计与合成 | 第47页 |
| 3.1.4 实验动物免疫 | 第47页 |
| 3.1.5 采血 | 第47页 |
| 3.1.6 猪瘟抗体检测 | 第47页 |
| 3.1.7 猪外周血单个核细胞（PBMCs）的分离 | 第47页 |
| 3.1.8 猪外周血CD4~+ T细胞的分离 | 第47页 |
| 3.1.9 总RNA的提取及反转录 | 第47-48页 |
| 3.1.10 TCR Vα 和Vβ 链家族的RT-PCR扩增 | 第48页 |
| 3.1.11 猪TCR α 链和 β 链的CDR3区基因扫描分析 | 第48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-58页 |
| 3.2.1 疫苗免疫猪CD4~+ T细胞TCR AV和TCR BV家族RT-PCR扩增结果 | 第48页 |
| 3.2.2 猪瘟抗体检测 | 第48-49页 |
| 3.2.3 免疫后CD4~+ T细胞TCR AV/BV家族的谱型变化 | 第49-58页 |
| 3.2.4 免疫猪CD4~+ T细胞TCR Vα/β 家族的克隆性分析 | 第58页 |
| 3.3 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 克隆化猪CD4~+ T细胞 αβTCR基因家族CDR3区的结构分析 | 第60-65页 |
| 4.1 材料与方法 | 第60-61页 |
| 4.1.1 菌种和试剂 | 第60页 |
| 4.1.2 引物设计与合成 | 第60页 |
| 4.1.3 PCR扩增克隆性增殖的TCR AV/BV基因家族 | 第60-61页 |
| 4.1.4 克隆载体的构建与鉴定 | 第61页 |
| 4.1.5 序列的生物信息学分析 | 第61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-63页 |
| 4.2.1 克隆性扩增的CD4~+ T细胞TCR Vα/β 亚家族RT-PCR扩增 | 第61页 |
| 4.2.2 克隆化CD4~+ T细胞TCR V区的优势取用 | 第61页 |
| 4.2.3 克隆化TCR基因CDR3区保守性氨基酸基序 | 第61-63页 |
| 4.3 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5-p IRES2-EGFP和TCR Vβ6-p IRES2-EGFP真核表达载体的构建及共转染研究 | 第65-75页 |
| 5.1 材料与方法 | 第65-68页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第65页 |
| 5.1.2 CSFV-C株相关抗原特异TCR基因的全长克隆 | 第65-66页 |
| 5.1.3 全长基因的序列测定及分析 | 第66页 |
| 5.1.4 真核表达载体引物设计与PCR扩增 | 第66页 |
| 5.1.5 真核表达载体的构建与鉴定 | 第66页 |
| 5.1.6 脂质体转染方法 | 第66-67页 |
| 5.1.6.1 细胞培养 | 第66-67页 |
| 5.1.6.2 转染 | 第67页 |
| 5.1.7 TCR Vα5 和TCR Vβ6 重组质粒转染 293T细胞后的表达与鉴定 | 第67-68页 |
| 5.1.7.1 荧光显微镜观察 | 第67页 |
| 5.1.7.2 RT-PCR和Real-time PCR检测TCR Vα5 和TCR Vβ6 基因在mRNA水平的表达 | 第67页 |
| 5.1.7.3 Western blot检测重组质粒转染细胞后EGFP蛋白的表达情况 | 第67-68页 |
| 5.2 结果与分析 | 第68-73页 |
| 5.2.1 CSFV-C株抗原特异性猪 αβTCR全长基因的克隆 | 第68页 |
| 5.2.2 猪 αβTCR全长基因的序列分析与结构预测 | 第68-69页 |
| 5.2.3 猪 αβTCR真核表达质粒的构建与鉴定 | 第69-70页 |
| 5.2.4 荧光显微镜观察转染效率 | 第70页 |
| 5.2.5 猪 αβTCR真核表达质粒转染细胞后mRNA水平的表达 | 第70-71页 |
| 5.2.6 实时定量PCR分析重组质粒转染 293T细胞后目的分子的转录情况 | 第71-72页 |
| 5.2.7 猪 αβTCR真核表达质粒转染细胞后目的蛋白的表达水平 | 第72-73页 |
| 5.3 讨论 | 第73-75页 |
| 第六章 全文结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
