| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-22页 |
| 1.1 猪圆环病毒2型的发现及其流行病学发展 | 第15-16页 |
| 1.1.1 PCV2的发现 | 第15页 |
| 1.1.2 PCV2的流行与分布 | 第15页 |
| 1.1.3 PCV2基因型分类和变化 | 第15-16页 |
| 1.2 PCV2引起的相关疾病 | 第16-19页 |
| 1.2.1 PMWS | 第16页 |
| 1.2.2 PRDC | 第16-17页 |
| 1.2.3 PDNS | 第17页 |
| 1.2.4 母猪繁殖障碍 | 第17页 |
| 1.2.5 CT | 第17-18页 |
| 1.2.6 PNP | 第18页 |
| 1.2.7 与猪其他病原体并发感染 | 第18-19页 |
| 1.3 PCV2致病机理 | 第19-20页 |
| 1.3.1 PCV2免疫抑制机理 | 第19页 |
| 1.3.2 PCV2感染与凋亡 | 第19-20页 |
| 1.4 磷酸化蛋白质组学在病毒感染中的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 蛋白质磷酸化修饰简介 | 第20页 |
| 1.4.2 病毒感染与磷酸化作用研究进展 | 第20-22页 |
| 第二章 上海地区PCV2分子流行病学调查 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 病料 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 病料的处理 | 第23页 |
| 2.2.2 提取病料组织中病毒的DNA/RNA | 第23页 |
| 2.2.3 病料中PCV1和PCV2检测 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PCV2-ORF2基因扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCV2-ORF2 PCR产物的回收纯化 | 第25页 |
| 2.2.6 回收PCR产物连接PMD18-T载体 | 第25页 |
| 2.2.7 制备感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.8 连接产物的转化感受态细胞 | 第26页 |
| 2.2.9 质粒小量的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.10 质粒PCR电泳鉴定 | 第27页 |
| 2.2.11 序列测定与遗传变异分析 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-34页 |
| 2.3.1 病料中PCV1和PCV2基因扩增结果 | 第27-28页 |
| 2.3.2 PCV2-ORF2基因扩增结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 PCV2-ORF2-pMD-18T重组质粒的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.3.4 PCV2-ORF2测序结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 PCV2-ORF2核苷酸序列遗传进化分析 | 第30-33页 |
| 2.3.6 PCV2-ORF2编码的氨基酸序列分析 | 第33-34页 |
| 2.3.7 PCV2-ORF2核苷酸与氨基酸序列同源性分析 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 PCV2感染猪肺泡巨噬细胞磷酸化蛋白质组学研究 | 第36-53页 |
| 3.1 材料 | 第36页 |
| 3.1.1 毒株、质粒和细胞 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 磷酸化蛋白质组学分析时间点的确定 | 第37-38页 |
| 3.2.1.1 病毒接种 | 第37页 |
| 3.2.1.2 间接免疫荧光法(IFA)检测PCV2 | 第37页 |
| 3.2.1.3 SYBR Green实时RT-PCR法检测细胞因子mRNA的变化 | 第37-38页 |
| 3.2.4 细胞样品制备 | 第38页 |
| 3.2.5 蛋白提取和酶解 | 第38-39页 |
| 3.2.6 肽段标记和磷酸化肽段富集 | 第39页 |
| 3.2.7 LC?MS/MS分析 | 第39页 |
| 3.2.8 数据分析 | 第39页 |
| 3.2.9 生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-51页 |
| 3.3.1 PCV2检测时间点的确定 | 第40-41页 |
| 3.3.1.1 IFA检测PCV2在PAM细胞系上的增殖 | 第40页 |
| 3.3.1.2 SYBR Green实时RT-PCR法检测细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β、IL-10的变化 | 第40-41页 |
| 3.3.2 利用ITRAQ LC?MS/MS对PCV2感染的PAM细胞进行磷酸化蛋白质组学的定量分析 | 第41-42页 |
| 3.3.3 亚细胞定位和功能注释分析 | 第42-45页 |
| 3.3.4 磷酸化蛋白参与信号通路分析 | 第45-47页 |
| 3.3.5 磷酸化蛋白间相互分析 | 第47-51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 1 | 第60-62页 |
| 附录 2 | 第62-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
