| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 禽流感病毒概述 | 第14-15页 |
| 1.2 NA蛋白结构及功能 | 第15-16页 |
| 1.2.1 NA蛋白结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 NA的功能 | 第16页 |
| 1.2.3 NA抑制剂 | 第16页 |
| 1.3 NS1蛋白的结构与功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 NS1蛋白的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 NS1蛋白的功能 | 第17-18页 |
| 1.4 AIV的常用诊断方法 | 第18-19页 |
| 1.4.1 病毒的分离鉴定 | 第18页 |
| 1.4.2 血清学检测 | 第18页 |
| 1.4.3 分子生物学诊断 | 第18-19页 |
| 1.5 蛋白质相互作用的研究方法 | 第19-20页 |
| 1.5.1 免疫共沉淀（co-IP） | 第19-20页 |
| 1.5.2 GST pull-down试验 | 第20页 |
| 1.5.3 酵母双杂交系统 | 第20页 |
| 1.5.4 蛋白芯片技术 | 第20页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 AIV N1-N9亚型NA蛋白的表达和间接ELISA工作条件的初步探索 | 第22-35页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 病毒 | 第22页 |
| 2.1.2 主要载体、菌株和细胞 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂和仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液配制方法 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 N1-N9亚型目的基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.2 重组转移载体pFastBacHTA-NA的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.3 重组穿梭载体Bacmid的构建 | 第25页 |
| 2.2.4 重组杆状病毒的获得和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 重组蛋白的表达、纯化和鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.6 间接ELISA工作条件的初步探索 | 第27-28页 |
| 2.3 结果 | 第28-33页 |
| 2.3.1 9 种亚型NA基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组转移载体的构建及重组穿梭载体Bacmid的PCR鉴定 | 第29页 |
| 2.3.3 重组杆状病毒的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 表达产物的检测和鉴定 | 第30页 |
| 2.3.5 间接ELISA条件的初步探索 | 第30-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 筛选与NS1蛋白相互作用的宿主蛋白 | 第35-39页 |
| 3.1 试验材料 | 第35页 |
| 3.1.1 病毒株、细胞、菌株及主要载体 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 应用IP技术筛选与AIV NS1蛋白相互作用的宿主蛋白 | 第35页 |
| 3.2.2 质谱鉴定（MS） | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-37页 |
| 3.3.1 IP结果 | 第36页 |
| 3.3.2 MS结果 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 宿主蛋白ANXA2与AIV NS1蛋白互作验证及对AIV复制影响的初步研究 | 第39-47页 |
| 4.1 试验材料 | 第39页 |
| 4.1.1 病毒株、细胞、菌株及主要载体 | 第39页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 4.2.1 AIV NS1基因的克隆 | 第39-40页 |
| 4.2.2 人源ANXA2基因扩增及克隆 | 第40-41页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀（Co-IP） | 第41页 |
| 4.2.4 内源性Co-IP | 第41页 |
| 4.2.5 激光共聚焦检测试验 | 第41-42页 |
| 4.2.6 siRNA沉默鉴定 | 第42-43页 |
| 4.2.7 TCID50试验结果 | 第43页 |
| 4.3 结果 | 第43-45页 |
| 4.3.1 重组质粒pCAF-NS1和pCAH-ANXA2的构建 | 第43页 |
| 4.3.2 NS1与ANXA2存在相互作用 | 第43-44页 |
| 4.3.3 NS1和ANXA2共定位于细胞浆中 | 第44页 |
| 4.3.4 ANXA2沉默后抑制子代病毒在细胞中的复制 | 第44-45页 |
| 4.3.5 ANXA2过表达促进AIV在细胞中的增殖 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 宿主蛋白AIFM1与AIV NS1蛋白互作验证 | 第47-51页 |
| 5.1 试验材料 | 第47页 |
| 5.1.1 病毒株、细胞、菌株及主要载体 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 5.2.1 人源AIFM1基因扩增及克隆 | 第47页 |
| 5.2.2 免疫共沉淀（Co-IP） | 第47-48页 |
| 5.2.3 Pull down试验 | 第48页 |
| 5.2.4 激光共聚焦检测试验 | 第48页 |
| 5.3 结果 | 第48-49页 |
| 5.3.1 重组质粒pCAF-NS1和pCAH-AIFM1的构建 | 第48-49页 |
| 5.3.2 NS1与AIFM1存在相互作用 | 第49页 |
| 5.3.3 NS1和AIFM1共定位于细胞浆中 | 第49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
