| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-28页 |
| 1.1 角蛋白 | 第16-18页 |
| 1.1.1 角蛋白的分子结构 | 第16页 |
| 1.1.2 角蛋白的加工工艺 | 第16-17页 |
| 1.1.2.1 角蛋白传统水解处理法 | 第16-17页 |
| 1.1.2.2 生物技术处理法 | 第17页 |
| 1.1.3 角蛋白的应用 | 第17-18页 |
| 1.1.3.1 饲料和添加剂 | 第17-18页 |
| 1.1.3.2 食品和医药 | 第18页 |
| 1.1.3.3 农药和化肥 | 第18页 |
| 1.1.3.4 制革生产 | 第18页 |
| 1.2 角蛋白酶 | 第18-25页 |
| 1.2.1 角蛋白酶的微生物来源 | 第18-19页 |
| 1.2.2 角蛋白酶的理化性质 | 第19-22页 |
| 1.2.2.1 角蛋白酶的分类 | 第19页 |
| 1.2.2.2 分子量和底物特异性 | 第19页 |
| 1.2.2.3 温度和pH特性 | 第19-21页 |
| 1.2.2.4 影响角蛋白酶活性的因素 | 第21-22页 |
| 1.2.3 微生物角蛋白酶对角蛋白的降解机理 | 第22页 |
| 1.2.4 角蛋白酶基因工程研究 | 第22-24页 |
| 1.2.4.1 编码角蛋白酶的基因 | 第23页 |
| 1.2.4.2 角蛋白酶基因的表达 | 第23-24页 |
| 1.2.5 角蛋白酶的应用研究 | 第24-25页 |
| 1.2.5.1 饲料生产 | 第24页 |
| 1.2.5.2 医疗卫生 | 第24-25页 |
| 1.2.5.3 制革行业 | 第25页 |
| 1.2.5.4 化妆品及其它行业 | 第25页 |
| 1.3 芽孢杆菌表达系统 | 第25-27页 |
| 1.3.1 芽孢杆菌表达系统简史 | 第25-26页 |
| 1.3.2 芽孢杆菌表达系统的特点 | 第26-27页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 Bacillus amyloliquefaciens K11来源角蛋白酶基因克隆、表达及功能研究 | 第28-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第28页 |
| 2.1.2 生化试剂、试剂盒与工具酶 | 第28-29页 |
| 2.1.3 培养基 | 第29页 |
| 2.1.4 引物序列的合成与DNA测序 | 第29页 |
| 2.1.5 仪器 | 第29页 |
| 2.1.6 溶液和底物的配制 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 羽毛降解能力评估以及角蛋白酶基因的获得 | 第30页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第30-33页 |
| 2.2.3 B. amyloliquefaciens K11基因组的提取 | 第33页 |
| 2.2.4 表达载体pUB110-kerK的构建 | 第33-35页 |
| 2.2.5 角蛋白酶基因功能的验证 | 第35页 |
| 2.2.6 蛋白质含量的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.7 蛋白酶酶活力的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.8 重组角蛋白酶KerK的性质研究 | 第37-38页 |
| 2.2.9 重组角蛋白酶对羽毛的体外降解实验 | 第38页 |
| 2.2.10 酶解产物分析实验 | 第38页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第38-45页 |
| 2.3.1 羽毛降解能力评估 | 第38-39页 |
| 2.3.2 kerK基因序列分析 | 第39-41页 |
| 2.3.3 pUB110-kerK载体的构建 | 第41页 |
| 2.3.4 角蛋白酶基因功能的验证 | 第41页 |
| 2.3.5 角蛋白酶的表达与纯化 | 第41-42页 |
| 2.3.6 角蛋白酶性质分析 | 第42-43页 |
| 2.3.7 羽毛的体外酶解 | 第43-44页 |
| 2.3.8 酶解产物分析 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-47页 |
| 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 Bacillus amyloliquefaciens K11来源角蛋白酶基因kerK过表达研究 | 第48-57页 |
| 3.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第48页 |
| 3.1.2 生化试剂、试剂盒与工具酶 | 第48页 |
| 3.1.3 培养基 | 第48页 |
| 3.1.4 引物序列的合成与DNA测序 | 第48-49页 |
| 3.1.5 仪器 | 第49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第49页 |
| 3.2.2 真核表达载体pPIC9/kerK的构建 | 第49-50页 |
| 3.2.3 重组酶KerK在毕赤酵母中的表达 | 第50-51页 |
| 3.2.4 诱导型高效表达载体pBSlac-kerK的构建 | 第51-52页 |
| 3.2.5 高效表达菌株的发酵研究 | 第52页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第52-54页 |
| 3.3.1 真核表达载体pPIC9/kerK的构建 | 第52-53页 |
| 3.3.2 重组酶KerK的酵母诱导表达 | 第53页 |
| 3.3.3 诱导型高效表达载体pBSlac-kerK的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.4 高效表达菌株的发酵研究 | 第54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-56页 |
| 本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 高效羽毛降解工程菌的构建 | 第57-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第57页 |
| 4.1.2 试剂、工具酶与试剂盒 | 第57页 |
| 4.1.3 培养基 | 第57页 |
| 4.1.4 引物序列的合成与DNA测序 | 第57页 |
| 4.1.5 仪器 | 第57页 |
| 4.2 实验方法 | 第57-58页 |
| 4.2.1 高效羽毛降解菌株的构建 | 第57-58页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第58-61页 |
| 4.3.1 高效羽毛降解菌的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.2 三种菌株胞外蛋白酶的比较 | 第59-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
