| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略词(ABBREVIATION) | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-17页 |
| 1 生物传感器在环境监测中的应用 | 第10-11页 |
| 1.1 特异性生物传感器 | 第10页 |
| 1.2 镉特异性生物传感器研究现状 | 第10-11页 |
| 2 绿色荧光蛋白GFP的特征及发光机理 | 第11-13页 |
| 2.1 GFP的结构 | 第11页 |
| 2.2 GFP的发光机制 | 第11-12页 |
| 2.3 GFP及其突变系 | 第12页 |
| 2.4 GFP的荧光特性 | 第12-13页 |
| 3 GFP蛋白在生命科学研究中的应用 | 第13-16页 |
| 3.1 GFP在转基因植物和动物筛选中的应用 | 第13页 |
| 3.2 GFP在环境微生物研究中的应用 | 第13-16页 |
| 3.2.1 GFP在生物传感器中的应用 | 第13-14页 |
| 3.2.2 GFP在环境微生物迁移中的应用 | 第14页 |
| 3.2.3 GFP在环境修复监测及微生物监测中的应用 | 第14页 |
| 3.2.4 GFP在生物膜和活性污泥菌群研究中的应用 | 第14-15页 |
| 3.2.5 GFP在微生物植物相互作用研究中的应用 | 第15页 |
| 3.2.6 GFP在微生物在作物根际定殖中的应用 | 第15-16页 |
| 3.3 GFP在细胞筛选中的应用 | 第16页 |
| 3.4 GFP在免疫学中的应用 | 第16页 |
| 4 本研究的目的 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-26页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第17页 |
| 1.2 培养基 | 第17页 |
| 1.3 试剂 | 第17-18页 |
| 1.4 试剂盒和酶 | 第18-19页 |
| 1.5 主要仪器 | 第19页 |
| 1.6 供试材料 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.1 菌株培养 | 第19页 |
| 2.2 EGFP标记的特异性镉响应生物传感器的构建 | 第19-21页 |
| 2.3 标记菌株生长曲线的测定 | 第21页 |
| 2.4 标记菌株对重金属镉的特异性响应的测定 | 第21页 |
| 2.5 标记菌株在不同Cd~(2+)浓度下质粒拷贝数的确定: | 第21-22页 |
| 2.6 细胞发光量与环境中镉浓度的关系 | 第22页 |
| 2.7 盆栽试验 | 第22-24页 |
| 2.7.1 实验设计 | 第22-23页 |
| 2.7.2 样品处理与制备 | 第23页 |
| 2.7.3 土壤样品中工程菌EGFP-X4荧光的测定 | 第23页 |
| 2.7.4 RT-PCR定量土壤样品中的工程菌EGFP-X4 | 第23-24页 |
| 2.7.5 小白菜Cd吸收量测定 | 第24页 |
| 2.7.6 土壤Cd形态的连续提取 | 第24页 |
| 2.8 工程菌EGFP-X4在土壤中的存活动态监测 | 第24-26页 |
| 2.8.1 平板计数法测定工程菌的数量 | 第25页 |
| 2.8.2 FCM确定工程菌在土壤总微生物中所占比例 | 第25-26页 |
| 结果与讨论 | 第26-40页 |
| 1 EGFP标记的特异性镉响应生物传感器的构建 | 第26-27页 |
| 2 镉响应生物传感器的生长曲线 | 第27页 |
| 3 镉响应生物传感器的特异性 | 第27-28页 |
| 4 传感质粒拷贝数的检测 | 第28-29页 |
| 5 传感器响应镉的生物模型的建立 | 第29-33页 |
| 6 盆栽实验结果 | 第33-38页 |
| 6.1 土壤样品中工程菌EGFP-X4的荧光变化 | 第33-34页 |
| 6.2 土壤样品中工程菌EGFP-X4的RT-PCR定量分析结果 | 第34页 |
| 6.3 不同重金属处理下小白菜的生长状态 | 第34-35页 |
| 6.4 小白菜的Cd吸收量 | 第35-36页 |
| 6.5 工程菌EGFP-X4对土壤中Cd形态的影响 | 第36-38页 |
| 7 镉响应生物传感器在土壤中的存活情况 | 第38-40页 |
| 7.1 工程菌的稀释平板计数结果 | 第38页 |
| 7.2 FCM确定工程菌在土壤总微生物中的比例 | 第38-40页 |
| 小结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
