| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 石竹简介 | 第13页 |
| 2 温敏雄性不育研究进展 | 第13-18页 |
| 2.1 温敏雄性不育现象及重要意义 | 第13-14页 |
| 2.2 温敏雄性不育的敏感时期 | 第14页 |
| 2.3 温敏雄性不育相关基因 | 第14-18页 |
| 2.3.1 能量代谢基因APRT | 第14-15页 |
| 2.3.2 能量代谢基因UGP | 第15-17页 |
| 2.3.3 雄性不育相关的花药发育基因 | 第17-18页 |
| 3 研究的目的意义与技术路线 | 第18-20页 |
| 3.1 目的及意义 | 第18页 |
| 3.2 技术路线 | 第18-20页 |
| 第二章 温敏雄性不育的细胞学原因探究 | 第20-31页 |
| 1 前言 | 第20页 |
| 2 试验材料 | 第20-22页 |
| 2.1 植物材料 | 第20-21页 |
| 2.2 植物材料处理 | 第21-22页 |
| 3 试验方法 | 第22-23页 |
| 3.1 半薄切片 | 第22页 |
| 3.2 扫描电镜 | 第22-23页 |
| 4 结果和分析 | 第23-29页 |
| 4.1 不同温度处理下花药发育的半薄切片观察 | 第23-26页 |
| 4.1.1 常温处理下花药发育过程的半薄切片观察 | 第23-25页 |
| 4.1.2 低温处理下花药发育过程的半薄切片观察 | 第25-26页 |
| 4.2 不同温度处理下花药发育的扫描电镜观察 | 第26-28页 |
| 4.2.1 常温处理下花药发育过程的扫描电镜观察 | 第26-27页 |
| 4.2.2 低温处理下花药发育过程的扫描电镜观察 | 第27-28页 |
| 4.3 不同温度处理下花药发育时期与花蕾长度的相关性 | 第28-29页 |
| 5 讨论 | 第29-31页 |
| 5.1 低温处理下花药不育时期的确定 | 第29-30页 |
| 5.2 低温处理下花药不育的细胞学原因 | 第30-31页 |
| 第三章 石竹转录组分析及温敏雄性不育相关基因的筛选 | 第31-43页 |
| 1 前言 | 第31-32页 |
| 2 试验材料 | 第32页 |
| 3 试验方法 | 第32-33页 |
| 3.1 样品准备和转录组文库测序 | 第32页 |
| 3.2 温敏雄性不育相关基因的初步分析 | 第32页 |
| 3.3 温敏雄性不育相关基因的半定量分析 | 第32-33页 |
| 4 结果和分析 | 第33-40页 |
| 4.1 转录组数据分析 | 第33-35页 |
| 4.1.1 转录组数据分布统计 | 第33-34页 |
| 4.1.2 转录组数据功能注释及分类 | 第34-35页 |
| 4.2 基因表达分析 | 第35-40页 |
| 4.2.1 基因表达谱差异分析 | 第35页 |
| 4.2.2 花药发育基因的表达差异分析 | 第35-38页 |
| 4.2.3 差异表达基因的半定量分析 | 第38-40页 |
| 5 讨论 | 第40-43页 |
| 5.1 ‘盈盈’转录组总体特征 | 第40页 |
| 5.2 差异表达基因的半定量分析 | 第40-41页 |
| 5.3 不育相关基因的筛选 | 第41-43页 |
| 第四章 温敏雄性不育相关基因的克隆及超量表达载体的构建 | 第43-59页 |
| 1 前言 | 第43-44页 |
| 2 试验材料 | 第44页 |
| 2.1 植物材料 | 第44页 |
| 2.2 试验菌株、载体 | 第44页 |
| 2.3 试验主要试剂的配置 | 第44页 |
| 3 试验方法 | 第44-53页 |
| 3.1 基因扩增模板的制备 | 第44-45页 |
| 3.1.1 植物总DNA提取 | 第44-45页 |
| 3.1.2 植物总RNA提取 | 第45页 |
| 3.1.3 cDNA第一链合成 | 第45页 |
| 3.2 FPNI-PCR技术扩增不育相关基因的gDNA全长 | 第45-48页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第46页 |
| 3.2.2 FPNI-PCR反应体系 | 第46-47页 |
| 3.2.3 FPNI-PCR反应程序 | 第47-48页 |
| 3.3 不育相关基因的cDNA全长扩增 | 第48-50页 |
| 3.3.1 PCR扩增cDNA全长 | 第48-49页 |
| 3.3.2 目的片段的回收 | 第49页 |
| 3.3.3 目的片段连接克隆载体 | 第49页 |
| 3.3.4 连接产物热激转化大肠杆菌 | 第49页 |
| 3.3.5 筛选和鉴定阳性克隆 | 第49-50页 |
| 3.3.6 阳性克隆的测序分析 | 第50页 |
| 3.4 不育相关基因超量表达载体的构建 | 第50-53页 |
| 3.4.1 摇菌 | 第50页 |
| 3.4.2 含目的基因全长的质粒DNA提取 | 第50-51页 |
| 3.4.3 双酶切及产物回收 | 第51页 |
| 3.4.4 目的片段连接超量表达载体 | 第51-52页 |
| 3.4.5 连接产物热激转化大肠杆菌 | 第52页 |
| 3.4.6 重组质粒的筛选和鉴定 | 第52页 |
| 3.4.7 重组质粒的双酶切验证 | 第52页 |
| 3.4.8 重组质粒导入根癌农杆菌EHA105 | 第52-53页 |
| 3.4.9 重组质粒导入根癌农杆菌EHA105的筛选鉴定 | 第53页 |
| 4 结果与分析 | 第53-56页 |
| 4.1 基因全长的获得及序列分析 | 第53-54页 |
| 4.2 不育相关基因超量表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.3 不育相关基因超量表达载体电转农杆菌 | 第55-56页 |
| 5 讨论 | 第56-59页 |
| 5.1 超量表达载体的选择 | 第56-57页 |
| 5.2 超量表达载体构建方法的选择 | 第57页 |
| 5.3 超量表达载体转化植物的预期效果 | 第57-59页 |
| 结论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
