摘要 | 第7-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
中英文缩略表(Abbreviation) | 第10-11页 |
1 前言 | 第11-18页 |
1.1 研究问题的由来 | 第11-12页 |
1.2 文献综述 | 第12-17页 |
1.2.1 ICAM-1 分子结构及其功能 | 第12-14页 |
1.2.2 FAK分子结构和生物学功能 | 第14-15页 |
1.2.3 miR-15b简介 | 第15-16页 |
1.2.4 PRRS简介 | 第16-17页 |
1.3 研究目的和意义 | 第17-18页 |
2 材料和方法 | 第18-41页 |
2.1 试验材料 | 第18-24页 |
2.1.1 动物材料 | 第18页 |
2.1.2 细胞系 | 第18-19页 |
2.1.3 主要仪器和试剂 | 第19-20页 |
2.1.4 主要试剂 | 第20-23页 |
2.1.5 引物序列 | 第23-24页 |
2.2 试验方法 | 第24-40页 |
2.2.1 采样 | 第24-25页 |
2.2.2 攻毒试验 | 第25-27页 |
2.2.3 细胞转染试验 | 第27-28页 |
2.2.4 总RNA提取方法 | 第28-29页 |
2.2.5 电泳检测RNA | 第29-30页 |
2.2.6 RNA的逆转录 | 第30页 |
2.2.7 总蛋白提取方法 | 第30页 |
2.2.8 总蛋白浓度的测定方法 | 第30-31页 |
2.2.9 聚合酶链式反应(PCR) | 第31-32页 |
2.2.10 实时荧光定量PCR(Real time-qPCR) | 第32页 |
2.2.11 PCR产物的电泳检测 | 第32-33页 |
2.2.12 免疫印迹试验(Western blot) | 第33-34页 |
2.2.13 免疫印迹膜再生 | 第34-35页 |
2.2.14 载体构建 | 第35-39页 |
2.2.15 双荧光素酶实验 | 第39-40页 |
2.3 统计学方法 | 第40-41页 |
3 结果与分析 | 第41-51页 |
3.1 炎症环境下FAK的表达变化 | 第41-44页 |
3.1.1 Poly(I:C)模拟病毒刺激小鼠脑微血管内皮细胞(b.End.3) | 第41-42页 |
3.1.2 LPS模拟细菌刺激小鼠脑微血管内皮细胞(b.End.3) | 第42页 |
3.1.3 小鼠腹腔注射LPS,检测肺组织中FAK的表达变化 | 第42-43页 |
3.1.4 感染PRRSV的猪肺组织中FAK的表达变化 | 第43-44页 |
3.2 ICAM-1 基因敲除对FAK表达的影响 | 第44-47页 |
3.2.1 ICAM-1 siRNA转染b.End.3 细胞,FAK的表达变化 | 第45-46页 |
3.2.2 ICAM-1 基因敲除小鼠肺组织中FAK的表达变化 | 第46-47页 |
3.3 ICAM-1 通过miR-15b-5p调控FAK表达的研究 | 第47-51页 |
3.3.1 ICAM-1 敲除小鼠肺组织以及转染ICAM-1 siRNA的b.End.3 细胞中miR-15b-5p的表达 | 第47-48页 |
3.3.2 FAK 3’UTR双荧光素酶报告载体的构建 | 第48-49页 |
3.3.3 miR-15b-5p靶向FAK 3’UTR区的双荧光素酶实验验证 | 第49-50页 |
3.3.4 分别转染miR-15b-5p inhibitor和mimics至b.End.3 细胞,检测FAK表达变化 | 第50-51页 |
4 讨论 | 第51-55页 |
4.1 炎症环境下FAK的表达变化 | 第51-52页 |
4.2 ICAM-1 基因敲除对FAK表达的影响 | 第52-53页 |
4.3 ICAM-1 通过miR-15b-5p调控FAK表达的研究 | 第53-55页 |
4.3.1 敲除ICAM-1 促进miR-15b-5p的表达 | 第53页 |
4.3.2 过表达miR-15b-5p抑制FAK的表达 | 第53-55页 |
5 结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-65页 |
致谢 | 第65-66页 |