| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 猪流行性腹泻 | 第12-15页 |
| 1.1.1 PED概述 | 第12页 |
| 1.1.2 PEDV病原学特征 | 第12页 |
| 1.1.3 PEDV基因组结构特征 | 第12-13页 |
| 1.1.4 PEDV编码蛋白简介 | 第13-14页 |
| 1.1.5 PEDV肠内增殖特征 | 第14-15页 |
| 1.1.6 PEDV的流行病学 | 第15页 |
| 1.2 抗病毒天然免疫 | 第15-25页 |
| 1.2.1 模式识别受体（PRRs） | 第15-20页 |
| 1.2.2 抗病毒天然免疫 | 第20-25页 |
| 1.3 PEDV与天然免疫 | 第25-27页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第3章 材料与方法 | 第28-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-32页 |
| 3.1.1 细胞、毒株与菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第28-29页 |
| 3.1.3 工具酶及主要化学试剂 | 第29页 |
| 3.1.4 Western Blot及IFA实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.5 培养基及其配制 | 第30-31页 |
| 3.1.6 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第31-32页 |
| 3.1.7 主要实验仪器及设备 | 第32页 |
| 3.1.8 分子生物学分析软件 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-42页 |
| 3.2.1 PEDV nsp7真核表达质粒的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 细胞样品总RNA的提取、反转录及实时荧光定量PCR | 第33-35页 |
| 3.2.3 限制性内切酶酶切反应 | 第35页 |
| 3.2.4 PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第35页 |
| 3.2.5 PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第35-36页 |
| 3.2.6 外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第36页 |
| 3.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第36页 |
| 3.2.8 连接产物的转化 | 第36-37页 |
| 3.2.9 重组质粒的制备与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.10 质粒的转染（脂质体介导的瞬时转染法） | 第38页 |
| 3.2.11 双荧光素酶报告基因检测 | 第38-39页 |
| 3.2.12 Western Blot、Co-IP及胞质胞核分离提取实验 | 第39-40页 |
| 3.2.13 间接免疫荧光实验及激光共聚焦显微镜观察 | 第40-41页 |
| 3.2.14 统计学方法 | 第41-42页 |
| 第4章 结果与分析 | 第42-51页 |
| 4.1 PEDV NSP7真核表达质粒的构建 | 第42页 |
| 4.2 PEDVNSP7抑制ISRE启动子活化与ISGS的表达 | 第42-44页 |
| 4.2.1 抑制ISRE启动子活化的PEDV编码蛋白的筛选 | 第42-43页 |
| 4.2.2 Real Time PCR检测超表达PEDV nsp7对ISGs产生的影响 | 第43-44页 |
| 4.3 NSP7抑制ISRE启动子活化的机制 | 第44-50页 |
| 4.3.1 PEDV nsp不影响JAK1、Tyk2、STAT1和STAT2的表达与磷酸化 | 第44-45页 |
| 4.3.2 PEDV nsp7抑制ISGF3介导的ISRE启动子活化 | 第45-46页 |
| 4.3.3 PEDV nsp7抑制STAT1、STAT2转位入核 | 第46-47页 |
| 4.3.4 PEDV nsp7与STAT1、STAT2相互作用，但不与IRF9相互作用 | 第47-48页 |
| 4.3.5 PEDV nsp7与STAT2的DBD结构域相互作用 | 第48-49页 |
| 4.3.6 PEDV nsp7与KPNA1竞争性结合STAT1，阻碍ISGF3核转运 | 第49-50页 |
| 4.4 PEDV NSP7对Ⅰ型干扰素信号转导的抑制作用与NSP8无关 | 第50-51页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第51-55页 |
| 5.1 讨论 | 第51-54页 |
| 5.1.1 PEDV nsp7拮抗I型干扰素信号转导的初步探讨 | 第52页 |
| 5.1.2 PEDV nsp7扰乱JAK-STAT信号通路 | 第52-53页 |
| 5.1.3 PEDV nsp7调控Ⅰ型IFN信号通路不依赖于nsp8 | 第53-54页 |
| 5.1.4 PEDV nsp7负调控Ⅰ型IFN信号通路的生物学意义 | 第54页 |
| 5.2 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |
