| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 骨骼肌概述 | 第14-15页 |
| 2.1 骨骼肌的生长发育与再生 | 第14-15页 |
| 2.2 骨骼肌的结构与功能 | 第15页 |
| 3 骨骼肌生长发育的相关调控因子 | 第15-17页 |
| 4 MicroRNA在骨骼肌中的作用 | 第17-18页 |
| 5 长非编码RNA | 第18-23页 |
| 5.1 长非编码RNA简介 | 第18-19页 |
| 5.2 lncRNA的生物学功能 | 第19-23页 |
| 5.2.1 lncRNA对成肌细胞增殖和分化的影响 | 第19-21页 |
| 5.2.2 lncRNA与肌肉再生 | 第21-22页 |
| 5.2.3 lncRNA与疾病 | 第22-23页 |
| 5.3 lncRNA的作用机制 | 第23页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料和方法 | 第25-50页 |
| 1 实验材料 | 第25-30页 |
| 1.1 实验样品 | 第25页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第25页 |
| 1.1.2 细胞样品 | 第25页 |
| 1.1.3 克隆载体 | 第25页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| 1.3 主要试剂与试剂盒 | 第26-27页 |
| 1.4 常用试剂及配制 | 第27-29页 |
| 1.5 表达谱芯片 | 第29页 |
| 1.6 主要数据库和软件 | 第29页 |
| 1.7 所用载体 | 第29-30页 |
| 2 试验方法 | 第30-50页 |
| 2.1 构建小鼠组织表达谱 | 第30-32页 |
| 2.1.1 小鼠组织样的总RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.1.2 RNA质量浓度检测 | 第31页 |
| 2.1.3 RNA反转录成cDNA | 第31-32页 |
| 2.2 细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2.1 细胞的复苏 | 第32页 |
| 2.2.2 细胞的增殖培养 | 第32-33页 |
| 2.2.3 细胞的分化培养 | 第33页 |
| 2.2.4 细胞的冻存 | 第33页 |
| 2.3 AK003290-siRNA干涉片段的选取 | 第33-34页 |
| 2.4 AK003290超表达载体构建 | 第34页 |
| 2.5 脂质体介导的细胞转染（6 孔板） | 第34页 |
| 2.6 C2C12细胞总RNA的提取和cDNA的制备 | 第34-35页 |
| 2.7 Quantitative real-time PCR分析 | 第35-38页 |
| 2.7.1 PCR的引物设计 | 第35-36页 |
| 2.7.2 荧光实时定量PCR | 第36-37页 |
| 2.7.3 定量数据分析 | 第37-38页 |
| 2.8 RACE扩增及序列检测 | 第38-40页 |
| 2.8.1 制备 5’/3’ RACE第一链 | 第38页 |
| 2.8.2 设计PCR扩增引物 | 第38-39页 |
| 2.8.3 快速扩增cDNA Ends | 第39-40页 |
| 2.8.4 琼脂糖凝胶电泳和成像 | 第40页 |
| 2.8.5 PCR产物的胶回收和克隆测序 | 第40页 |
| 2.9 细胞核和细胞质的RNA分离 | 第40-41页 |
| 2.10 Northern blotting分析 | 第41-43页 |
| 2.10.1 RNA提取 | 第41页 |
| 2.10.2 琼脂糖变性胶电泳 | 第41页 |
| 2.10.3 转膜 | 第41-42页 |
| 2.10.4 紫外交联 | 第42页 |
| 2.10.5 亚甲基蓝染色 | 第42页 |
| 2.10.6 探针标记 | 第42-43页 |
| 2.10.7 预杂交 | 第43页 |
| 2.10.8 杂交 | 第43页 |
| 2.10.9 洗膜 | 第43页 |
| 2.10.10 放射自显影 | 第43页 |
| 2.11 荧光原位杂交(Henderson et al) | 第43-44页 |
| 2.11.1 细胞培养 | 第43页 |
| 2.11.2 细胞固定与通透 | 第43-44页 |
| 2.11.3 探针检测 | 第44页 |
| 2.11.4 DAPI染色 | 第44页 |
| 2.12 EdU染色 | 第44-46页 |
| 2.12.1 细胞培养 | 第44页 |
| 2.12.2 EdU标记 | 第44页 |
| 2.12.3 细胞固定化 | 第44-45页 |
| 2.12.4 Apollo染色 | 第45页 |
| 2.12.5 DNA染色 | 第45页 |
| 2.12.5 DAPI染色 | 第45-46页 |
| 2.12.6 图片获取及分析 | 第46页 |
| 2.13 蛋白检测分析 | 第46-48页 |
| 2.13.1 蛋白的提取 | 第46页 |
| 2.13.2 蛋白质的检测 | 第46-48页 |
| 2.14 免疫荧光 | 第48页 |
| 2.15 RTCA×CELLigence系统细胞增殖实验 | 第48-49页 |
| 2.15.1 细胞悬液的准备 | 第48页 |
| 2.15.2 E-Plate 96(Roche公司产品)准备 | 第48-49页 |
| 2.16 细胞迁移检测 | 第49-50页 |
| 第三章 结果和分析 | 第50-69页 |
| 1 LncRNA-AK003290的自身特征 | 第50-53页 |
| 1.1 对AK003290的组织表达谱进行分析 | 第50页 |
| 1.2 AK003290在成肌细胞分化过程中的表达情况 | 第50-51页 |
| 1.3 AK003290的 5＇Race和 3＇Race以及Northern blot | 第51-52页 |
| 1.3.1 细胞总RNA的完整性和纯度检测 | 第51页 |
| 1.3.2 AK003290的 5＇Race，3＇Race和Northern blot结果 | 第51-52页 |
| 1.4 AK003290编码能力预测 | 第52页 |
| 1.5 AK003290的核质定位 | 第52-53页 |
| 2 AK003290对成肌细胞增殖的影响 | 第53-58页 |
| 2.1 干涉AK003290对成肌细胞增殖的影响 | 第53-56页 |
| 2.1.1 AK003290干涉片段筛选和干涉效率检测 | 第53-54页 |
| 2.1.2 干涉AK003290对成肌细胞增殖及其相关基因的影响 | 第54-56页 |
| 2.2 超表达AK003290对成肌细胞增殖的影响 | 第56-58页 |
| 3 AK003290对成肌细胞分化的影响 | 第58-63页 |
| 3.1 干涉AK003290对成肌细胞分化的影响 | 第58-60页 |
| 3.2 超表达AK003290对成肌细胞分化的影响 | 第60-63页 |
| 4 AK003290对成肌细胞迁移的影响 | 第63-65页 |
| 4.1 干涉AK003290对成肌细胞迁移的影响 | 第63-64页 |
| 4.2 超表达AK003290对成肌细胞迁移的影响 | 第64-65页 |
| 5 利用基因芯片检测干涉AK003290前后差异基因表达的变化情况并做相关分析 | 第65-69页 |
| 5.1 芯片样品干涉效率验证 | 第65页 |
| 5.2 芯片中差异基因筛选 | 第65-66页 |
| 5.3 差异基因的可靠性验证 | 第66页 |
| 5.4 差异基因的Gene ontology(GO)显著性富集分析 | 第66-68页 |
| 5.5 KEGG Pathway显著性富集分析 | 第68-69页 |
| 第四章 讨论 | 第69-73页 |
| 1 AK003290在成肌细胞增殖和分化过程中的表达模式 | 第69-70页 |
| 2 AK003290的功能分析 | 第70-71页 |
| 3 AK003290调控机制的预测 | 第71-72页 |
| 4 下一步计划 | 第72-73页 |
| 第五章 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
