| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-33页 |
| 1.1 自组装 | 第12-16页 |
| 1.1.1 分子自组装 | 第12-13页 |
| 1.1.2 自组装与纳米技术 | 第13页 |
| 1.1.3 自组装的应用 | 第13-15页 |
| 1.1.4 自组装优势和挑战 | 第15-16页 |
| 1.2 蛋白自组装 | 第16-19页 |
| 1.2.1 蛋白纳米环 | 第16-17页 |
| 1.2.2 超分子蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.3 三维结构组装 | 第18-19页 |
| 1.3 化学修饰介导的蛋白自组装 | 第19-23页 |
| 1.3.1 甲酰甘氨酸生成酶的发现及催化机理 | 第20页 |
| 1.3.2 FGE用于定点化学修饰以及蛋白自组装 | 第20-22页 |
| 1.3.3 醛标签应用前景 | 第22-23页 |
| 1.4 基于相互作用蛋白的蛋白胞内自组装 | 第23-31页 |
| 1.4.1 相互作用蛋白 | 第23-24页 |
| 1.4.2 胞内自组装表达及催化策略 | 第24-25页 |
| 1.4.3 双分子荧光互补验证蛋白组装 | 第25-31页 |
| 1.5 本课题研究意义和研究思路 | 第31-33页 |
| 第2章 醛标签系统构建 | 第33-50页 |
| 2.1 前言 | 第33页 |
| 2.2 实验仪器试剂 | 第33-36页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第34-35页 |
| 2.2.3 主要溶液配制 | 第35-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-45页 |
| 2.3.1 醛标签系统的构建 | 第36-40页 |
| 2.3.2 共转化以及表达纯化 | 第40-42页 |
| 2.3.3 蛋白质电泳验证 | 第42-43页 |
| 2.3.4 蛋白浓度测定 | 第43页 |
| 2.3.5 利用Alexa488-酰肼测醛基转化率 | 第43-45页 |
| 2.4 实验结果 | 第45-49页 |
| 2.4.1 aFDH蛋白PCR结果以及pET-28a双酶切结果 | 第45页 |
| 2.4.2 构建的醛标签系统 | 第45页 |
| 2.4.3 镍柱纯化蛋白电泳图 | 第45-48页 |
| 2.4.4 蛋白浓度标准曲线、Alexa Fluor 488-酰肼物质的量与荧光强度标准曲线 | 第48-49页 |
| 2.4.5 不同酶的醛标签表达系统的醛基转化率 | 第49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第3章 醛标签系统的优化 | 第50-57页 |
| 3.1 前言 | 第50页 |
| 3.2 实验仪器及试剂 | 第50-51页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第50-51页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.3.1 pET-21a-FGE的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 pET-21a-FGE与目标蛋白共表达、镍柱纯化 | 第52页 |
| 3.3.3 FGE酶的表达与镍柱纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.4 FGE酶的体外催化 | 第53页 |
| 3.3.5 利用氨氧基PEG对酶进行修饰 | 第53页 |
| 3.3.6 修饰后电泳验证 | 第53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.4.1 FGE蛋白PCR结果 | 第53-54页 |
| 3.4.2 FGE镍柱纯化图以及EGa电泳图 | 第54-55页 |
| 3.4.3 醛基转化率以及氨氧基修饰PEG电泳图 | 第55页 |
| 3.4.4 FGE体外催化醛基转化率 | 第55-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第4章 蛋白胞内组装 | 第57-68页 |
| 4.1 前言 | 第57页 |
| 4.2 实验仪器与方法 | 第57-58页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第57-58页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第58-59页 |
| 4.3.2 共转化、诱导表达以及菌体破碎 | 第59页 |
| 4.3.3 包涵体活性以及温度、pH稳定性 | 第59页 |
| 4.3.4 全细胞催化及其最适温度、最适pH值 | 第59-60页 |
| 4.3.5 包涵体扫描电子显微镜成像 | 第60页 |
| 4.4 实验结果 | 第60-66页 |
| 4.4.1 共表达电泳图 | 第60页 |
| 4.4.2 液相峰图 | 第60-61页 |
| 4.4.3 包涵体活性以及温度、pH稳定性 | 第61-64页 |
| 4.4.4 全细胞催化及其最适温度、最适pH值 | 第64-65页 |
| 4.4.5 SEM图 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第5章 荧光互补验证胞内组装 | 第68-78页 |
| 5.1 前言 | 第68页 |
| 5.2 实验仪器与试剂 | 第68-69页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第68-69页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 5.3.1 质粒构建 | 第69-72页 |
| 5.3.2 转化与表达 | 第72页 |
| 5.3.3 荧光检测 | 第72页 |
| 5.3.4 细胞荧光强度变化 | 第72页 |
| 5.4 实验结果 | 第72-76页 |
| 5.4.1 PCR电泳图 | 第72-73页 |
| 5.4.2 蛋白电泳图 | 第73-74页 |
| 5.4.3 细胞荧光图 | 第74-75页 |
| 5.4.4 细胞荧光强度变化 | 第75-76页 |
| 5.5 本章小结 | 第76-78页 |
| 第6章 总结与展望 | 第78-80页 |
| 6.1 总结 | 第78-79页 |
| 6.2 展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
