| 第一章 本论文立论依据 | 第15-22页 |
| 第二章 硒代谷胱甘肽硫转移酶模拟 GPX | 第22-62页 |
| 第一节 序言 | 第22-24页 |
| 第二节 硒代谷胱甘肽硫转移酶表达载体的构建 | 第24-30页 |
| 一 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1 主要试剂 | 第24-25页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第25页 |
| 1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 二 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.1 目的基因的获得及扩增 | 第25-26页 |
| 2.2 目的基因的定点突变S9C 的引入 | 第26页 |
| 2.3 突变C86S 的引入 | 第26-27页 |
| 2.4 突变C2OOS 的引入 | 第27页 |
| 2.5 重组质粒的构建 | 第27页 |
| 三 结果与讨论 | 第27-30页 |
| 3.1 目的基因的扩增及突变 | 第28-29页 |
| 3.2 克隆 | 第29-30页 |
| 第三节 硒代谷胱甘肽硫转移酶、野生型谷胱甘肽硫转移酶及其突变体的表达、分离提纯及初步表征 | 第30-38页 |
| 一 实验材料 | 第30-31页 |
| 1.1 主要试剂 | 第30页 |
| 1.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第31页 |
| 二 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.1 野生型 GST 及其突变体的诱导表达 | 第32页 |
| 2.2 Seleno-GST 的诱导表达 | 第32-33页 |
| 2.3 野生型GST、突变体及Seleno-GST 的分离提纯 | 第33页 |
| 2.4 高效液相色谱分离目的蛋白 | 第33页 |
| 2.5 质谱鉴定 | 第33-34页 |
| 2.6 蛋白质含量的测定 | 第34页 |
| 2.7 硒含量的测定 | 第34页 |
| 三 结果分析 | 第34-37页 |
| 3.1 GST 突变体的表达与分离提纯 | 第34-35页 |
| 3.2 Seleno-GST 的诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.3 Seleno-GST 的分离提纯与初步表征 | 第36-37页 |
| 四 讨论 | 第37-38页 |
| 第四节 硒代谷胱甘肽硫转移酶的酶学性质分析 | 第38-48页 |
| 一 实验材料 | 第38-39页 |
| 二 实验方法 | 第39-40页 |
| 2.1 活力的测定 | 第39页 |
| 2.2 蛋白质含量测定 | 第39页 |
| 2.3 最适温度和最适pH 值的测定 | 第39-40页 |
| 三 结果分析 | 第40-43页 |
| 3.1 Seleno-LuGST1-1 的GPX 与GST 活力 | 第40-42页 |
| 3.2 最适温度和最适pH 值 | 第42-43页 |
| 四 讨论 | 第43-48页 |
| 第五节 硒代谷胱甘肽硫转移酶的动力学分析 | 第48-58页 |
| 一 实验材料 | 第48页 |
| 二 实验方法 | 第48页 |
| 2.1 蛋白质含量测定 | 第48页 |
| 2.2 稳态动力学性质研究 | 第48页 |
| 三 结果分析 | 第48-54页 |
| 四 讨论 | 第54-58页 |
| 本章小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 第三章 具有 GPX和SOD活力的双功能酶的构建 | 第62-93页 |
| 第一节 序言 | 第62-63页 |
| 第二节 含硒双功能酶表达载体的构建 | 第63-70页 |
| 一 实验材料 | 第63-64页 |
| 1.1 主要试剂 | 第63-64页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第64页 |
| 1.3 主要仪器 | 第64页 |
| 二 实验方法 | 第64-66页 |
| 2.1 Seleno-LuGST1-1 基因的获得及扩增 | 第64-65页 |
| 2.2 SW-SOD 基因的扩增及融合 | 第65页 |
| 2.3 重组质粒的构建 | 第65-66页 |
| 三 结果与讨论 | 第66-67页 |
| 3.1 目的基因的获得及扩增 | 第66页 |
| 3.2 克隆 | 第66-67页 |
| 四 讨论 | 第67-70页 |
| 第三节 含硒双功能酶的表达、提纯及性质研究 | 第70-89页 |
| 一 实验材料 | 第70-71页 |
| 1.1 主要试剂 | 第70-71页 |
| 1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 二 实验方法 | 第71-75页 |
| 2.1 野生型SW-SOD 的诱导表达及分离提纯 | 第72页 |
| 2.2 S-GST-SOD 的诱导表达 | 第72-73页 |
| 2.3 Seleno-GST-SOD 的诱导表达 | 第73页 |
| 2.4 Seleno-GST-SOD 及S-GST-SOD 的分离提纯 | 第73-74页 |
| 2.5 蛋白质含量的测定 | 第74页 |
| 2.6 Seleno-GST-SOD 及S-GST-SOD 分子量的测定 | 第74页 |
| 2.7 活力的测定 | 第74-75页 |
| 2.8 Seleno-GST-SOD 和SOD 抗H_2O_2 氧化的能力的测定 | 第75页 |
| 2.9 Seleno-GST-SOD 的GPX 活力的动力学性质的测定 | 第75页 |
| 三 结果分析 | 第75-82页 |
| 3.1 野生型SW-SOD 的表达及提纯 | 第75-76页 |
| 3.2 Seleno-GST-SOD 与S-GST-SOD 的表达与提纯 | 第76-78页 |
| 3.3 Seleno-GST-SOD 及S-GST-SOD 分子量的测定 | 第78-79页 |
| 3.4 Seleno-GST-SOD 及S-GST-SOD 的GPX 和SOD 活力 | 第79-80页 |
| 3.5 Seleno-GST-SOD 的GPX 活力的动力学性质 | 第80-81页 |
| 3.6 Seleno-GST-SOD 的GPX 与SOD 活力的协同作用 | 第81-82页 |
| 四 讨论 | 第82-89页 |
| 本章小结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第四章 抗氧化酶模拟物生物学效应的研究 | 第93-120页 |
| 第一节 序言 | 第93-95页 |
| 第二节 硒代谷胱甘肽硫转移酶的生物学效应 | 第95-99页 |
| 一 实验材料与仪器 | 第95页 |
| 1.1 实验材料 | 第95页 |
| 1.2 主要仪器 | 第95页 |
| 二 实验方法 | 第95-96页 |
| 2.1 牛心线粒体的制备 | 第95页 |
| 2.2 Fe~(2+)/Vc 诱导线粒体损伤 | 第95-96页 |
| 2.3 线粒体膨胀度的测定 | 第96页 |
| 2.4 脂质过氧化水平的测定 | 第96页 |
| 三 结果分析 | 第96-98页 |
| 3.1 seleno-LuGST1-1 对损伤线粒体膨胀度的影响 | 第96-97页 |
| 3.2 seleno-LuGST1-1 对线粒体脂质过氧化的抑制 | 第97-98页 |
| 四 讨论 | 第98-99页 |
| 第三节含硒双功能酶的生物学效应 | 第99-104页 |
| 一 实验材料与仪器 | 第99-100页 |
| 1.1 实验材料 | 第99-100页 |
| 1.2 主要仪器 | 第100页 |
| 二 实验方法 | 第100页 |
| 2.1 牛心线粒体的制备 | 第100页 |
| 2.2 Xanthine / XOD / Fe~(2+)诱导线粒体损伤 | 第100页 |
| 三 结果分析 | 第100-102页 |
| 3.1 Seleno-GST-SOD 对损伤线粒体膨胀度的影响 | 第100-101页 |
| 3.2 Seleno-GST-SOD 对线粒体脂质过氧化的抑制 | 第101-102页 |
| 四 讨论 | 第102-104页 |
| 第四节 GPX 模拟物对DNA 氧化损伤的保护作用 | 第104-116页 |
| 一 实验材料 | 第104页 |
| 1.1 主要试剂 | 第104页 |
| 1.2 主要仪器 | 第104页 |
| 二 实验方法 | 第104-105页 |
| 2.1 GSH/Fe~(3+)/O_2 损伤体系 | 第104页 |
| 2.2 DTT/Fe~(3+)/O_2 损伤体系 | 第104-105页 |
| 2.3 t-BuOOH 损伤体系 | 第105页 |
| 三 结果分析 | 第105-113页 |
| 3.1 GSH/Fe~(3+)/O_2 体系对质粒DNA 的损伤及GPX 模拟物的保护作用 | 第105-107页 |
| 3.2 DTT/Fe~(3+)/O_2 体系对质粒DNA 的损伤及GPX 模拟物的保护作用 | 第107-110页 |
| 3.3 t-BuOOH 对质粒DNA 的损伤及GPX 模拟物的保护作用 | 第110-113页 |
| 四 讨论 | 第113-116页 |
| 本章小结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-120页 |
| 第五章 文献综述 | 第120-166页 |
| 第一节 硒代半胱氨酸的生物合成 | 第120-127页 |
| 一 硒蛋白的生物合成 | 第120-122页 |
| 二 原核生物的硒代半胱氨酸插入元件 | 第122-123页 |
| 三 真核生物的 SECIS | 第123-125页 |
| 四 硒蛋白的原核表达 | 第125-126页 |
| 五 利用半胱氨酸缺陷型大肠杆菌原核表达硒蛋白 | 第126-127页 |
| 第二节 谷胱甘肽过氧化物酶 | 第127-138页 |
| 一 谷胱甘肽过氧化物酶的结构 | 第127-129页 |
| 1.1 牛 CGPX 的二级结构 | 第127-128页 |
| 1.2 牛cGPX 活性中心的结构 | 第128-129页 |
| 1.3 人 PGPX 的活性中心结构 | 第129页 |
| 二 谷胱甘肽过氧化物酶的生物学作用 | 第129-131页 |
| 三 谷胱甘肽过氧化物酶的催化机制 | 第131-134页 |
| 3.1 乒乓机制 | 第131-132页 |
| 3.2 顺序机制 | 第132-134页 |
| 四 谷胱甘肽过氧化物酶的人工模拟 | 第134-138页 |
| 4.1 小分子化学酶模型 | 第134-136页 |
| 4.2 含硒抗体酶 | 第136-137页 |
| 4.3 生物印迹酶 | 第137-138页 |
| 4.4 半合成含硒酶 | 第138页 |
| 第三节 超氧化物歧化酶 | 第138-147页 |
| 一 SOD 的来源、种类和分布 | 第139-141页 |
| 二 SOD 的结构 | 第141-145页 |
| 2.1 一级结构与序列同一性 | 第141-142页 |
| 2.2 三维结构 | 第142-143页 |
| 2.3 活性中心 | 第143-144页 |
| 2.4 SOD 的结构稳定性 | 第144-145页 |
| 三 SOD 的活力测定 | 第145-146页 |
| 四 SOD 的生物学作用 | 第146-147页 |
| 第四节 谷胱甘肽转硫酶 | 第147-156页 |
| 一 GST 的解毒作用 | 第148-150页 |
| 二 GST 的晶体结构 | 第150-154页 |
| 三 哺乳动物的GST 的分类标准 | 第154-155页 |
| 四 GST 分类的进化意义 | 第155-156页 |
| 参考文献 | 第156-166页 |
| 结论 | 第166-168页 |
| 作者简历 | 第168-170页 |
| 致谢 | 第170-171页 |
| 中文摘要 | 第171-175页 |
| ABSTRACT | 第175页 |
