| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 单核细胞增生李斯特菌简介 | 第11-13页 |
| 1.1.1 李斯特菌生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.2 李斯特菌侵染机制 | 第12页 |
| 1.1.3 李斯特菌病预防措施 | 第12-13页 |
| 1.2 生物被膜研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 生物被膜简介 | 第13页 |
| 1.2.2 生物被膜的形成 | 第13-14页 |
| 1.2.3 影响生物被膜形成的因素 | 第14-15页 |
| 1.2.4 生物被膜对细菌的保护作用 | 第15-16页 |
| 1.2.5 生物被膜的危害与防治 | 第16-17页 |
| 1.3 sigB操纵子简介 | 第17-19页 |
| 1.4 RsbU蛋白简介 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的和主要创新点 | 第20-21页 |
| 1.6 本研究的实验结果和下一步研究计划 | 第21-22页 |
| 第二章 单核细胞增生李斯特菌EGDe△rsbU单缺失和EGDe△sigB△rsbU双缺失突变株的构建以及对细菌生长的影响 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.3 引物的设计 | 第23页 |
| 2.1.4 试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 Lm EGDe全基因组的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 rsbU基因上下游同源臂rsbU (A+B)的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.3 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.4 重组穿梭质粒pLSV101-rsbU(A+B)的构建及验证 | 第25-26页 |
| 2.2.5 LmECDe和EGDe△sigB电转感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.2.6 电转化重组质粒pLSV101-rsbU(A+B)进入Lm感受态细胞中 | 第26-27页 |
| 2.2.7 同源重组及检测 | 第27-28页 |
| 2.2.8 传代培养丢失质粒及检测 | 第28页 |
| 2.2.9 EGDe△rsbU单缺失和EGDe△sigB△rsbU双缺失突变株的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.10 Lm生长曲线的测定 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-34页 |
| 2.3.1 rsbU基因上下游同源臂rsbU (A+B)的扩增结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 重组穿梭质粒pLSV101-rsbU(A+B)的构建结果 | 第30-31页 |
| 2.3.3 重组穿梭质粒pLSV101-rsbU(A+B)电转化进入EGDe和EGDe△sigB中检测结果 | 第31-32页 |
| 2.3.4 EGDe和EGDe△sigB 42℃双交换重组检测结果 | 第32-33页 |
| 2.3.5 EGDe△rsbU和EGDe△sigB△rsbU缺失突变株的构建结果验证 | 第33-34页 |
| 2.3.6 RsbU和(或)SigB缺失对单核细胞增生李斯特菌生长的影响 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 单核细胞增生李斯特菌中RsbU和(或)SigB缺失对生物被膜形成能力的影响 | 第36-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 3.1.1 菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 培养基 | 第36-38页 |
| 3.1.3 试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第39页 |
| 3.2 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 微孔板法检测菌株的生长和生物被膜的形成 | 第39-40页 |
| 3.2.2 倒置显微镜观察生物被膜的形态 | 第40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.3.1 25℃条件下,不同培养基中RsbU和(或)SigB对生物被膜的影响 | 第40-43页 |
| 3.3.2 37℃条件下,不同培养基中RsbU和(或)SigB对生物被膜的影响 | 第43-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 半定量RT-PCR探究RsbU对Lm毒力基因以及某些生物被膜相关基因的影响 | 第48-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-50页 |
| 4.1.1 菌株 | 第48-49页 |
| 4.1.2 培养基 | 第49页 |
| 4.1.3 引物的设计 | 第49-50页 |
| 4.1.4 试剂 | 第50页 |
| 4.1.5 主要实验仪器 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 基因组提取 | 第50-51页 |
| 4.2.2 总RNA提取 | 第51页 |
| 4.2.3 RNA含量测定 | 第51页 |
| 4.2.4 RNA完整性检测 | 第51页 |
| 4.2.5 反转录得到cDNA | 第51页 |
| 4.2.6 RT-PCR | 第51-52页 |
| 4.2.7 电泳及软件分析 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-57页 |
| 4.3.1 引物特异性检测结果 | 第53页 |
| 4.3.2 RT-PCR电泳结果图 | 第53-54页 |
| 4.3.3 灰度值分析结果图 | 第54-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
