GAL3敲除对酿酒酵母生理及乙醇发酵性能的影响
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 酿酒酵母Leioir途径中的酶 | 第13页 |
| 1.1.1 半乳糖激酶(GAL1) | 第13页 |
| 1.1.2 1-磷酸半乳糖尿苷转移酶(GAL7) | 第13页 |
| 1.1.3 变旋酶,差向异构酶(GAL10) | 第13页 |
| 1.2 半乳糖代谢基因表达的调控 | 第13-17页 |
| 1.2.1 GAL4——转录激活因子 | 第13-14页 |
| 1.2.2 GAL80录抑制因子 | 第14页 |
| 1.2.3 GAL3——信号感应与传导蛋白 | 第14页 |
| 1.2.4 各个调控蛋白之间的关系 | 第14-15页 |
| 1.2.5 两种GAL基因表达调控模型 | 第15-16页 |
| 1.2.6 GAL3信号感应与传导蛋白研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3 课题介绍与研究 | 第17-20页 |
| 1.3.1 课题研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 1.3.2 实验技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 酶和主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 其他试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 菌株的活化和培养 | 第23页 |
| 2.2.2 菌株保藏 | 第23页 |
| 2.2.3 酿酒酵母单倍体制备 | 第23-27页 |
| 2.2.3.1 子囊孢子制备的方法 | 第23页 |
| 2.2.3.2 制备酿酒酵母单倍体菌株 | 第23页 |
| 2.2.3.3 单倍体的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.3.4 酿酒酵母总DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3.5 酿酒酵母感受态的制备 | 第25页 |
| 2.2.3.6 大肠杆菌感受态制备 | 第25-26页 |
| 2.2.3.7 大肠杆菌的转化 | 第26页 |
| 2.2.3.8 GAL3基因完整性的验证 | 第26-27页 |
| 2.2.4 敲除组件的构建 | 第27-32页 |
| 2.2.4.1 敲除组件引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 酿酒酵母转化 | 第28-29页 |
| 2.2.4.3 筛选转化子 | 第29-30页 |
| 2.2.4.4 去除KanMX抗性标记 | 第30页 |
| 2.2.4.5 单倍体复倍 | 第30-31页 |
| 2.2.4.6 生长曲线的测定 | 第31页 |
| 2.2.4.7 葡萄糖阻遏作用的研究 | 第31页 |
| 2.2.4.8 蔗糖发酵实验 | 第31页 |
| 2.2.4.9 糖蜜发酵实验 | 第31-32页 |
| 2.2.5 酒精度的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.5.1 取样 | 第32页 |
| 2.2.5.2 气相色谱测乙醇含量 | 第32页 |
| 2.2.5.3 含糖量的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.6 氧含量对乙醇发酵的影响 | 第33页 |
| 2.2.7 酿酒酵母细胞形态观察 | 第33页 |
| 2.2.8 出芽率的检测 | 第33页 |
| 2.2.9 产孢率的检测 | 第33页 |
| 2.2.10 酵母的假菌丝 | 第33-34页 |
| 2.2.11 细胞壁生理检测 | 第34页 |
| 2.2.12 乙酸耐受性测试 | 第34页 |
| 2.2.13 乙醇耐受性测试 | 第34页 |
| 2.2.14 碳源同化研究 | 第34页 |
| 2.2.15 相对呼吸强度的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.16 高温耐受性实验 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-65页 |
| 3.1 GAL3基因的敲除 | 第36-43页 |
| 3.1.1 MF1015单倍体制备 | 第36-37页 |
| 3.1.2 GAL3基因完整性验证 | 第37-38页 |
| 3.1.3 敲除组件的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.4 转化子验证 | 第39-40页 |
| 3.1.5 单倍体复倍 | 第40-42页 |
| 3.1.6 抗性标记的去除 | 第42-43页 |
| 3.2 菌株生理特性和发酵性能的研究 | 第43-65页 |
| 3.2.1 生长曲线 | 第43-46页 |
| 3.2.2 蔗糖和糖蜜发酵的结果 | 第46-47页 |
| 3.2.3 糖蜜和蔗糖发酵性总糖的检测结果 | 第47-48页 |
| 3.2.4 半乳糖发酵 | 第48-49页 |
| 3.2.5 氧含量对乙醇发酵的影响 | 第49-51页 |
| 3.2.6 葡萄糖对半乳糖利用抑制作用的研究 | 第51-55页 |
| 3.2.7 乙酸耐受性结果 | 第55页 |
| 3.2.8 乙醇耐受性结果 | 第55-56页 |
| 3.2.9 酿酒酵母高温耐受性检测 | 第56-57页 |
| 3.3.10 相对呼吸强度的测定 | 第57-58页 |
| 3.3.11 酿酒酵母单菌落及细胞的形态特征 | 第58-59页 |
| 3.3.12 出芽率的检测 | 第59-61页 |
| 3.3.13 产孢率的检测 | 第61页 |
| 3.3.14 酵母假菌丝形成 | 第61-63页 |
| 3.3.15 细胞壁生理检测 | 第63页 |
| 3.3.16 碳源同化实验 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-67页 |
| 4.1 酿酒酵母单倍体的筛选 | 第65页 |
| 4.2 GAL3基因的敲除及突变菌株生理分析 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录1 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
