| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 2,3-丁二醇的的性质 | 第12页 |
| 1.2 2,3-丁二醇的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 2,3-丁二醇的生产方法 | 第13页 |
| 1.4 微生物合成2,3-丁二醇的生理意义 | 第13-14页 |
| 1.5 微生物合成2,3-丁二醇的代谢途径 | 第14-16页 |
| 1.6 2,3-丁二醇的立体异构体及其形成机制 | 第16-17页 |
| 1.7 微生物法合成(R,R)-2,3-丁二醇的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.7.1 生产菌种 | 第17页 |
| 1.7.2 发酵底物的选择 | 第17-18页 |
| 1.7.3 (R,R)-2,3-丁二醇发酵工艺的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.7.4 利用代谢工程手段改造(R,R)-2,3-丁二醇生产菌株的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.7.5 运用合成生物学策略构建(R,R)-2,3-丁二醇生产菌株的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.8 课题研究的意义及目的 | 第21-22页 |
| 1.9 本实验技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 多粘类芽孢杆菌利用廉价氮源生产(R,R)-2,3-丁二醇 | 第23-40页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 菌株 | 第23页 |
| 2.2.2 酶与实验试剂 | 第23-25页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.4 培养基 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.3.1 培养条件 | 第26页 |
| 2.3.2 菌株P.polymyxa DSM365在种子培养基生长曲线的测定 | 第26页 |
| 2.3.3 不同浓度乙酸钠对(R,R)-2,3-丁二醇发酵指标的影响 | 第26页 |
| 2.3.4 不同浓度豆粕粉对(R,R)-2,3-丁二醇发酵指标的影响 | 第26页 |
| 2.3.5 不同浓度中性蛋白酶对(R,R)-2,3-丁二醇发酵指标的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.6 Platkett-Burman(PB)实验设计 | 第27页 |
| 2.3.7 响应面实验设计 | 第27页 |
| 2.4 分析方法 | 第27-30页 |
| 2.4.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第27-28页 |
| 2.4.2 蔗糖浓度的测定 | 第28页 |
| 2.4.3 气相色谱测定(R,R)-2,3-丁二醇、乙偶姻的浓度 | 第28-30页 |
| 2.4.4 (R,R)-2,3-丁二醇光学纯度测定 | 第30页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第30-38页 |
| 2.5.1 菌株P.polymyxa DSM 365生长曲线的测定 | 第30-31页 |
| 2.5.2 乙酸钠对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响 | 第31-32页 |
| 2.5.3 豆粕粉浓度对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响 | 第32-33页 |
| 2.5.4 中性蛋白酶浓度对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响 | 第33-34页 |
| 2.5.5 PB实验优化发酵培养基 | 第34-36页 |
| 2.5.6 中心组合实验和响应面分析 | 第36-37页 |
| 2.5.7 培养基优化后摇瓶批次补料发酵过程曲线 | 第37-38页 |
| 2.6 本章小结 | 第38-40页 |
| 第三章 多粘类芽孢杆菌同时利用廉价碳源、氮源生产(R,R)-2,3-丁二醇 | 第40-48页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 菌株 | 第40页 |
| 3.2.2 酶和试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第41页 |
| 3.2.4 培养基 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-42页 |
| 3.3.1 木薯淀粉的液化处理 | 第41页 |
| 3.3.2 同步糖化发酵条件 | 第41-42页 |
| 3.3.3 不同初始浓度的碳源对(R,R)-2,3-丁二醇发酵指标的影响 | 第42页 |
| 3.3.4 不同浓度α-淀粉酶对(R,R)-2,3-丁二醇发酵指标的影响 | 第42页 |
| 3.3.5 不同浓度糖化酶对(R,R)-2,3-丁二醇发酵指标的影响 | 第42页 |
| 3.4 分析方法 | 第42-43页 |
| 3.4.1 葡萄糖浓度的测定 | 第42-43页 |
| 3.4.2 气相色谱测定(R,R)-2,3-丁二醇、乙偶姻的浓度 | 第43页 |
| 3.4.3 (R,R)-2,3-丁二醇光学纯度测定 | 第43页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第43-46页 |
| 3.5.1 木薯淀粉浓度对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.2 不同浓度α-淀粉酶对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响 | 第44页 |
| 3.5.3 不同浓度糖化酶对(R,R)-2,3-丁二醇发酵的影响 | 第44-45页 |
| 3.5.4 培养基优化后发酵过程曲线 | 第45-46页 |
| 3.6 本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 合成生物学策略构建产(R,R)-2,3-丁二醇大肠杆菌工程菌株 | 第48-65页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 菌株与质粒 | 第48-49页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第49页 |
| 4.2.3 酶制剂及相关试剂盒 | 第49页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-56页 |
| 4.3.1 P.polymyxa基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| 4.3.2 乙酰乳酸合成酶基因(alsS)、乙酰乳酸脱羧酶基因(alsD)、2,3-丁二醇脱氢酶基因(bdh)的克隆 | 第50-52页 |
| 4.3.3 重组质粒的构建 | 第52-54页 |
| 4.3.4 重组质粒在大肠杆菌的诱导表达 | 第54-55页 |
| 4.3.5 含有重组质粒的大肠杆菌E.coli BL21(DE3)发酵甘油合成(R,R)-2,3-丁二醇 | 第55页 |
| 4.3.6 检测方法 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第56-63页 |
| 4.4.1 重组质粒pETDuet-alsS-alsD-bdh的构建 | 第56-61页 |
| 4.4.2 含有重组质粒的E.coli BL21(DE3)的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第61页 |
| 4.4.3 发酵产物的定性分析 | 第61-62页 |
| 4.4.4 重组菌株诱导发酵产物的定量分析 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65页 |
| 5.2 问题与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录一 | 第75-78页 |
| 附录二 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第82页 |
