| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 干扰素概述 | 第13-14页 |
| 1.1.1 干扰素的来源与定义 | 第13页 |
| 1.1.2 干扰素的分类 | 第13-14页 |
| 1.2 IFN-α 研究进展 | 第14页 |
| 1.2.1 IFN-α 家族研究进展 | 第14页 |
| 1.2.2 IFN-α 的生物学活性研究进展 | 第14页 |
| 1.3 Bo IFN-α 研究进展 | 第14-15页 |
| 1.3.1 Bo IFN-α 的特征 | 第14-15页 |
| 1.3.2 重组Bo IFN-α 的研究进展 | 第15页 |
| 1.4 牛乳铁蛋白素研究进展 | 第15-18页 |
| 1.4.1 牛乳铁蛋白素的发现 | 第15-16页 |
| 1.4.2 牛乳铁蛋白素衍生物概述 | 第16-17页 |
| 1.4.3 基因工程方法表达牛乳铁蛋白素及其应用 | 第17-18页 |
| 1.5 利用巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白的研究 | 第18-19页 |
| 1.5.1 巴斯德毕赤酵母的特点 | 第18-19页 |
| 1.5.2 巴斯德毕赤酵母的应用 | 第19页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 病毒、质粒、宿主菌、细胞和血清 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-26页 |
| 2.2.1 Bo IFN-α0/2 成熟肽基因的克隆及序列分析 | 第21-22页 |
| 2.2.2 重组酵母表达载体p PICZαA-Bo IFN-α0/2 的构建及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.3 重组质粒p PICZαA-Bo IFN-α0/2 电转化巴斯德毕赤酵母 | 第23页 |
| 2.2.4 重组酵母的PCR鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.5 重组Bo IFN-α0/2 的表达与初步纯化 | 第24页 |
| 2.2.6 重组Bo IFN-α0/2 的SDS-PAGE鉴定和Western blot分析 | 第24页 |
| 2.2.7 重组Bo IFN-α0/2 体外抗病毒活性分析 | 第24-25页 |
| 2.2.8 重组Bo IFN-α0/2 理化性质分析 | 第25-26页 |
| 2.3 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的表达与生物活性鉴定 | 第26-31页 |
| 2.3.1 Bo IFN-α0/LFB融合基因的获得 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组酵母表达质粒的构建及鉴定 | 第27-29页 |
| 2.3.3 重组酵母的电转化及鉴定 | 第29页 |
| 2.3.4 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的表达与初步纯化 | 第29页 |
| 2.3.5 重组Bo IFN-α0/LFB的SDS-PAGE鉴定和Western blot分析 | 第29-30页 |
| 2.3.6 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的生物活性 | 第30页 |
| 2.3.7 数据统计 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-45页 |
| 3.1 Bo IFN-α0/2 成熟肽基因的克隆 | 第31-33页 |
| 3.1.1 Bo IFN-α0/2 成熟肽基因的PCR扩增 | 第31页 |
| 3.1.2 重组质粒p EASY-Blunt-Simple-Bo IFN-α0/2 的酶切鉴定 | 第31页 |
| 3.1.3 Bo IFN-α0/2 成熟肽序列的分析 | 第31-33页 |
| 3.2 重组酵母表达载体的构建及鉴定 | 第33页 |
| 3.3 重组酵母的PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4 Bo IFN-α0/2 重组蛋白的SDS-PAGE和Western blot分析 | 第34页 |
| 3.5 重组Bo IFN-α0/2 体外抗病毒活性分析 | 第34-36页 |
| 3.5.1 重组Bo IFN-α0/2 抗VSV的活性 | 第34-36页 |
| 3.5.2 重组Bo IFN-α0/2 抗VSV活性阻断分析 | 第36页 |
| 3.5.3 重组Bo IFN-α0/2 对IBRV的抗病毒效果 | 第36页 |
| 3.6 重组Bo IFN-α0/2 理化性质分析 | 第36-37页 |
| 3.6.1 重组Bo IFN-α0/2 胰酶敏感性分析 | 第36页 |
| 3.6.2 重组Bo IFN-α0/2 p H敏感性分析 | 第36-37页 |
| 3.6.3 重组Bo IFN-α0/2 温度敏感性分析 | 第37页 |
| 3.7 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的表达与生物活性鉴定 | 第37-39页 |
| 3.7.1 Bo IFN-α0/LFB融合基因的PCR扩增 | 第37-39页 |
| 3.8 重组酵母表达载体的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 3.8.1 p PICZαA-Bo IFN-α0-LFB的构建及鉴定 | 第39页 |
| 3.8.2 p GAPZαA-Bo IFN-α0-LFB和p GAPZαA-LFB-Bo IFN-α0 的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 3.9 重组酵母的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.9.1 重组酵母GS115-p PICZαA-Bo IFN-α0-LFB的鉴定 | 第40页 |
| 3.9.2 重组酵母GS115-pGAPZαA-Bo IFN-α0-LFB的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.9.3 重组酵母GS115-pGAPZαA-LFB-Bo IFN-α0 的鉴定 | 第41页 |
| 3.10 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的SDS-PAGE和Western blot分析 | 第41-42页 |
| 3.11 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的生物活性 | 第42-45页 |
| 3.11.1 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白体外抗VSV活性分析 | 第42页 |
| 3.11.2 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白体外抗金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度的测定 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 Bo IFN-α 多基因家族的研究及其亚型的划分 | 第45页 |
| 4.2 Bo IFN-α0/2 的特性及分析 | 第45-46页 |
| 4.3 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白的生物活性 | 第46页 |
| 4.4 Bo IFN-α0/LFB融合蛋白缺乏抗菌活性的分析 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第55页 |
