| 中文摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第14-21页 |
| 第一部分 文献综述 | 第21-33页 |
| 第一章 镉的危害 | 第21-23页 |
| 第二章 自噬概述 | 第23-30页 |
| 1 细胞自噬定义及分类 | 第23-24页 |
| 2 自噬的发生过程 | 第24-26页 |
| 3 自噬的信号调控 | 第26-28页 |
| 3.1 AMPK-mTOR信号通路与自噬 | 第26页 |
| 3.2 Class Ⅲ PI3k -Beclin-1与自噬 | 第26-27页 |
| 3.3 Ras/Raf/ERK信号通路与自噬 | 第27-28页 |
| 3.4 内质网应激与自噬 | 第28页 |
| 4 镉对自噬的影响 | 第28-30页 |
| 第三章 自噬与细胞衰老 | 第30-33页 |
| 1 细胞衰老概述 | 第30-31页 |
| 2 神经细胞衰老 | 第31页 |
| 3 自噬与细胞衰老 | 第31-33页 |
| 第二部分 试验研究 | 第33-76页 |
| 第一章 镉诱导神经细胞衰老 | 第33-45页 |
| 1 材料与方法 | 第33-40页 |
| 1.1 实验动物和细胞 | 第33页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第33-34页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第34-35页 |
| 1.4 PC12细胞培养 | 第35页 |
| 1.5 大鼠大脑皮质神经细胞的分离及培养 | 第35-36页 |
| 1.6 xCELLigence细胞实时分析技术(RTCA)检测细胞指数(CI) | 第36页 |
| 1.7 β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老 | 第36页 |
| 1.8 鬼笔环肽荧光染色观察细胞F-actin形态 | 第36-37页 |
| 1.9 蛋白免疫印迹法检测衰老相关蛋白表达 | 第37-38页 |
| 1.10 qRT-PCR检测大鼠大脑皮质神经细胞炎性因子基因表达 | 第38-40页 |
| 1.11 统计学分析 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-43页 |
| 2.1 镉诱导神经细胞衰老 | 第40-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第二章 镉诱导的自噬与神经细胞衰老之间的关系 | 第45-55页 |
| 1 材料和方法 | 第45-47页 |
| 1.1 实验动物 | 第45页 |
| 1.2 实验细胞株 | 第45页 |
| 1.3 主要仪器和试剂 | 第45-46页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第46页 |
| 1.5 大脑皮质神经细胞的分离及培养 | 第46页 |
| 1.6 PC12细胞培养 | 第46页 |
| 1.7 β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老 | 第46页 |
| 1.8 蛋白免疫印迹法检测自噬及衰老相关蛋白表达 | 第46页 |
| 1.9 激光共聚焦免疫荧光技术检测P21蛋白表达 | 第46-47页 |
| 1.10 qRT-PCR检测大鼠大脑皮质神经细胞炎性因子基因表达 | 第47页 |
| 1.11 xCELLigence细胞实时分析技术RTCA检测PC12细胞CI | 第47页 |
| 1.12 PC12细胞超微结构观察 | 第47页 |
| 1.13 统计学方法 | 第47页 |
| 2 结果 | 第47-53页 |
| 2.1 镉诱导神经细胞自噬的发生 | 第47-48页 |
| 2.2 雷帕霉素(RAP)对镉暴露PC12细胞β-半乳糖苷酶的表达的影响 | 第48-49页 |
| 2.3 RAP对镉暴露PC12细胞衰老相关蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| 2.4 免疫荧光观察RAP对镉暴露PC12细胞P21蛋白表达的影响 | 第50页 |
| 2.5 RAP对镉致原代神经细胞炎性因子表达的影响 | 第50-51页 |
| 2.6 自噬抑制剂氯喹(CQ)对镉暴露PC12细胞增殖曲线的影响 | 第51-52页 |
| 2.7 CQ对镉暴露PC12细胞超微结构的影响 | 第52页 |
| 2.8 抑制自噬对衰老相关蛋白的表达的影响 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 内质网应激在镉诱导神经细胞自噬中的作用 | 第55-62页 |
| 1 材料和方法 | 第55-56页 |
| 1.1 实验动物 | 第55页 |
| 1.2 实验细胞株 | 第55页 |
| 1.3 主要仪器和试剂 | 第55-56页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第56页 |
| 1.5 大脑皮质神经细胞的分离及培养 | 第56页 |
| 1.6 PC12细胞培养 | 第56页 |
| 1.7 蛋白免疫印迹法检测自噬及内质网应激相关蛋白表达 | 第56页 |
| 1.8 免疫荧光技术检测Bip蛋白表达 | 第56页 |
| 1.9 激光共聚焦观察EGFP-RFP-LC3的表达及分布 | 第56页 |
| 1.10 统计学方法 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-60页 |
| 2.1 镉对神经细胞内质网应激相关蛋白表达的影响 | 第56-57页 |
| 2.2 内质网应激在镉诱导神经细胞自噬中的作用 | 第57-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 Bip/AMPK在镉诱导神经细胞自噬与衰老中的作用 | 第62-70页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 1.1 实验动物 | 第62页 |
| 1.2 实验细胞株 | 第62页 |
| 1.3 主要仪器和试剂 | 第62-63页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第63页 |
| 1.5 PC12细胞培养 | 第63页 |
| 1.6 试剂盒检测β-半乳糖苷酶表达 | 第63页 |
| 1.7 蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达 | 第63页 |
| 1.8 激光共聚焦观察EGFP-RFP-LC3的表达及分布 | 第63页 |
| 1.9 统计学方法 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-68页 |
| 2.1 Bip在镉诱导自噬中的作用 | 第63-66页 |
| 2.2 Bip在镉激活AMPK/mTOR通路中的作用 | 第66-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 ROS在镉致神经细胞自噬和衰老中的作用 | 第70-76页 |
| 1 材料和方法 | 第70-71页 |
| 1.1 实验动物 | 第70-71页 |
| 1.2 实验细胞株 | 第71页 |
| 1.3 主要仪器和试剂 | 第71页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第71页 |
| 1.5 PC12细胞培养 | 第71页 |
| 1.6 大脑皮质神经细胞的分离及培养 | 第71页 |
| 1.7 蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达 | 第71页 |
| 1.8 试剂盒检测β-半乳糖苷酶表达 | 第71页 |
| 1.9 统计学方法 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-75页 |
| 2.1 NAC对镉致神经细胞自噬相关蛋白表达的影响 | 第71-73页 |
| 2.2 NAC对镉致PC12细胞β-半乳糖苷酶表达的影响 | 第73页 |
| 2.3 NAC对镉致PC12细胞衰老相关蛋白表达的影响 | 第73-74页 |
| 2.4 NAC对镉致原代神经细胞IL1α、IL6基因表达的影响 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 全文结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第103-104页 |
