| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 1 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 细胞周期 | 第9-11页 |
| 1.1.1 细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 | 第9-11页 |
| 1.2 细胞周期蛋白激酶抑制蛋白 1B | 第11-15页 |
| 1.2.1 p27 对细胞周期的调控 | 第11-12页 |
| 1.2.2 p27 的表达调控 | 第12-14页 |
| 1.2.3 p27 的磷酸化修饰和泛素化修饰 | 第14页 |
| 1.2.4 p27 的亚细胞定位 | 第14-15页 |
| 1.2.5 p27 在睾丸发育中的表达规律 | 第15页 |
| 1.3 SUMO化修饰 | 第15-17页 |
| 1.3.1 SUMO化修饰与细胞周期 | 第16-17页 |
| 1.3.2 SUMO化修饰与蛋白的亚细胞运输 | 第17页 |
| 1.4 支持细胞的增殖和功能性成熟 | 第17-19页 |
| 1.4.1 支持细胞的增殖 | 第17-18页 |
| 1.4.2 支持细胞的功能性成熟 | 第18页 |
| 1.4.3 p27 和p21 调节睾丸支持细胞的增殖 | 第18-19页 |
| 1.5 小结 | 第19-20页 |
| 2 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 3 材料和方法 | 第21-42页 |
| 3.1 p27 真核表达载体的构建 | 第21-29页 |
| 3.1.1 材料、试剂 | 第21页 |
| 3.1.2 培养基 | 第21-22页 |
| 3.1.3 仪器 | 第22页 |
| 3.1.4 方法 | 第22-29页 |
| 3.2 免疫组织化学 | 第29-32页 |
| 3.2.1 材料和试剂 | 第29页 |
| 3.2.2 实验动物 | 第29-30页 |
| 3.2.3 溶液、缓冲液配制 | 第30页 |
| 3.2.4 组织固定 | 第30页 |
| 3.2.5 组织石蜡包埋和组织切片 | 第30-31页 |
| 3.2.6 免疫组化染色 | 第31-32页 |
| 3.3 Western blot | 第32-36页 |
| 3.3.1 材料和试剂 | 第32页 |
| 3.3.2 溶液、缓冲液的配制 | 第32-33页 |
| 3.3.3 仪器 | 第33页 |
| 3.3.4 操作步骤 | 第33-36页 |
| 3.4 小鼠睾丸支持细胞的分离培养 | 第36-38页 |
| 3.4.1 试剂、溶液和实验动物 | 第36-37页 |
| 3.4.2 仪器 | 第37页 |
| 3.4.3 小鼠睾丸支持细胞的分离和培养方法 | 第37-38页 |
| 3.5 小鼠睾丸支持细胞转染 | 第38-39页 |
| 3.5.1 试剂、溶液 | 第38页 |
| 3.5.2 仪器 | 第38页 |
| 3.5.3 转染方法 | 第38-39页 |
| 3.6 细胞增殖检测 | 第39-40页 |
| 3.6.1 试剂 | 第39页 |
| 3.6.2 仪器 | 第39页 |
| 3.6.3 检测方法 | 第39页 |
| 3.6.4 统计学分析 | 第39-40页 |
| 3.7 免疫荧光细胞化学 | 第40-41页 |
| 3.7.1 材料、试剂 | 第40页 |
| 3.7.2 操作方法 | 第40-41页 |
| 3.8 式细胞仪测定细胞周期 | 第41-42页 |
| 3.8.1 试剂 | 第41页 |
| 3.8.2 仪器设备 | 第41页 |
| 3.8.3 操作方法 | 第41页 |
| 3.8.4 统计学分析 | 第41-42页 |
| 4 结果与分析 | 第42-50页 |
| 4.1 p27 在不同日龄小鼠睾丸中的表达和定位 | 第42-43页 |
| 4.1.1 免疫组织化学检测不同日龄小鼠睾丸中p27 的定位 | 第42-43页 |
| 4.1.2 Westen blot检测不同日龄小鼠睾丸p27 的表达水平 | 第43页 |
| 4.2 小鼠p27 的SUMO化修饰位点的预测 | 第43-44页 |
| 4.3 p27 真核表达载体的构建 | 第44-46页 |
| 4.3.1 小鼠p27 基因cDNA的克隆 | 第44页 |
| 4.3.2 小鼠CDNK1B基因真核表达载体的构建和鉴定 | 第44-46页 |
| 4.3.3 小鼠CDNK1B基因SUMO修饰位点突变载体的构建 | 第46页 |
| 4.4 小鼠p27Kip1 的SUMO1 修饰的验证和SUMO1 修饰位点的筛选 | 第46-48页 |
| 4.4.1 小鼠p27Kip1 在K189 被SUMO化修饰 | 第46-47页 |
| 4.4.2 免疫共沉淀检测p27 的SUMO化位点 | 第47-48页 |
| 4.5 p27 的SUMO-1 修饰对支持细胞周期的影响 | 第48-50页 |
| 4.5.1 支持细胞最佳转染效率的检测 | 第48-49页 |
| 4.5.2 p27 的SUMO-1 修饰促进支持细胞的G1 期阻滞 | 第49-50页 |
| 5 讨论 | 第50-53页 |
| 5.1 p27 的SUMO-1 修饰 | 第50-51页 |
| 5.2 p27 的SUMO-1 修饰影响其稳定性 | 第51页 |
| 5.3 p27 的SUMO-1 修饰影响p27 对支持细胞G1 期的阻滞 | 第51-52页 |
| 5.4 总结 | 第52页 |
| 5.5 本文不足之处与下一步计划 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
