| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 TGF-β/smads信号通路研究概述 | 第12-18页 |
| 1 TGF-β/smads信号通路概述 | 第12-15页 |
| 1.1 TGF-β 超家族及信号通路主要成员 | 第12-13页 |
| 1.2 TGF-β/smads信号通路的转导机制及主要进展 | 第13-14页 |
| 1.3 RNA干扰技术已成为研究鱼类信号通路的主要手段之一 | 第14-15页 |
| 2 TGF-β/smads信号通路调控鱼类生长发育 | 第15-16页 |
| 2.1 TGF-β 相关信号因子调控鱼卵细胞成熟 | 第15页 |
| 2.2 BMP亚家族调控鱼类骨形态发育 | 第15-16页 |
| 3 TGF-β1/smad4信号通路参与调节Ⅰ型胶原蛋白的表达 | 第16页 |
| 4 研究的目的意义和主要内容 | 第16-18页 |
| 第二章 草鱼TGF-β1、Smad4基因克隆及真核过表达和RNA干扰表达载体的构建 | 第18-29页 |
| 1 材料与方法 | 第19-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第19页 |
| 1.1.1 实验用鱼 | 第19页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 1.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 1.2.1 RNA提取及cDNA的合成 | 第19-20页 |
| 1.2.2 带酶切位点的TGF-β1 基因ORF片段的获得 | 第20页 |
| 1.2.3 带酶切位点的Smad4基因ORF片段的获得 | 第20-21页 |
| 1.3 TGF-β1、Smad4基因真核过表达载体的构建 | 第21-22页 |
| 1.3.1 TGF-β1 基因ORF片段正向插入表达载体 | 第21-22页 |
| 1.3.2 Smad4基因正向插入表达载体 | 第22页 |
| 1.4 TGF-β1、Smad4基因RNA干扰表达载体的构建 | 第22-25页 |
| 1.4.1 shRNA的合成 | 第22-23页 |
| 1.4.2 TGF-β1 基因shRNA片段插入干扰表达载体 | 第23-24页 |
| 1.4.3 Smad4基因shRNA片段插入干扰表达载体 | 第24-25页 |
| 1.5 重组载体的鉴定与保存 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-26页 |
| 2.1 TGF-β1、Smad4基因ORF扩增结果 | 第25-26页 |
| 2.2 重组载体双酶切 | 第26页 |
| 3 讨论 | 第26-29页 |
| 第三章 过表达和RNA干扰表达载体细胞水平活性检测 | 第29-43页 |
| 1 实验材料 | 第29页 |
| 1.1 实验鱼 | 第29页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.1 草鱼成纤维细胞的分离培养 | 第29-30页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第30-31页 |
| 2.3 斑马鱼ZF4细胞瞬时转染 | 第31页 |
| 2.4 荧光定量 | 第31-33页 |
| 2.4.1 细胞总RNA提取及反转录 | 第32页 |
| 2.4.2 荧光定量检测 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-41页 |
| 3.1 草鱼成纤维细胞形态图及ZF4细胞转染效果 | 第33-34页 |
| 3.2 草鱼TGF-β1、Smad4蛋白结构域及同源序列比对分析 | 第34-36页 |
| 3.3 293T细胞培养及转染 | 第36页 |
| 3.4 荧光定量结果 | 第36-41页 |
| 4 讨论和总结 | 第41-43页 |
| 第四章 过表达和RNA干扰表达载体鱼体活性检测 | 第43-50页 |
| 1 实验材料 | 第43页 |
| 1.1 实验鱼 | 第43页 |
| 1.2 试剂和仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-45页 |
| 2.1 质粒提取 | 第43页 |
| 2.2 肌肉组织总RNA提取及cDNA合成 | 第43-44页 |
| 2.3 荧光定量实验 | 第44-45页 |
| 2.3.1 荧光定量引物设计 | 第44页 |
| 2.3.2 荧光定量反应 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| 4 讨论与总结 | 第48-50页 |
| 全文总结与展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录 硕士期间论文发表情况 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
