| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第11-29页 |
| 1.1 泛素蛋白酶体降解系统概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 泛素化修饰的级联酶促反应 | 第11-14页 |
| 1.1.2 泛素化修饰中的E3和底物 | 第14页 |
| 1.2 HECT类泛素连接酶NEDL1和NEDL2的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.2.1 HECT类泛素连接酶Nedd4家族 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Nedd4家族的活性调控和功能 | 第15-17页 |
| 1.2.3 NEDL1和NEDL2的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 肠神经系统概述 | 第18-25页 |
| 1.3.1 ENS的来源和结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 ENS发育调控 | 第20-24页 |
| 1.3.3 ENS相关疾病 | 第24-25页 |
| 1.4 肾脏概述 | 第25-28页 |
| 1.4.1 肾脏的发育过程 | 第25-27页 |
| 1.4.2 肾脏的发育调控 | 第27-28页 |
| 1.5 本论文的研究目的 | 第28-29页 |
| 第2章 材料与方法 | 第29-36页 |
| 2.1 试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.1 蛋白质免疫印迹相关试剂 | 第29页 |
| 2.1.2 组织裂解相关溶液 | 第29页 |
| 2.1.3 肠神经元分离及培养相关溶液 | 第29页 |
| 2.1.4 X-gal染色相关试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.5 AChE染色相关试剂 | 第30页 |
| 2.1.6 鼠尾DNA提取相关试剂 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第30-31页 |
| 2.2.2 细胞转染 | 第31页 |
| 2.2.3 蛋白质免疫印迹 | 第31页 |
| 2.2.4 蛋白质免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.2.5 组织蛋白提取 | 第32页 |
| 2.2.6 间接免疫荧光 | 第32页 |
| 2.2.7 鼠尾DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.8 石蜡切片 | 第33页 |
| 2.2.9 免疫组化 | 第33-34页 |
| 2.2.10 HE染色 | 第34页 |
| 2.2.11 X-gal染色 | 第34页 |
| 2.2.12 AChE染色 | 第34页 |
| 2.2.13 肠神经元的分离及培养 | 第34-36页 |
| 第3章 NEDL1和NEDL2基因敲除小鼠模型的建立 | 第36-46页 |
| 3.1 引言 | 第36-37页 |
| 3.2 NEDL1全基因敲除小鼠模型的建立 | 第37-42页 |
| 3.2.1 Cre-LoxP系统 | 第37-39页 |
| 3.2.2 NEDL1中靶等位基因的确定 | 第39-41页 |
| 3.2.3 NEDL1~(LacZ/LacZ)（NEDL1~(-/-)）小鼠的获得 | 第41-42页 |
| 3.3 NEDL2全基因敲除小鼠模型的建立 | 第42-44页 |
| 3.3.1 NEDL2中靶等位基因的确定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 NEDL2~(LacZ/LacZ)（NEDL2~(-/-)）小鼠的获得 | 第43-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 第4章 NEDL1和NEDL2表达谱分析 | 第46-53页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 蛋白质免疫印迹检测NEDL1和NEDL2的表达 | 第46-48页 |
| 4.2.1 蛋白质免疫印迹检测NEDL1的表达 | 第46-47页 |
| 4.2.2 蛋白质免疫印迹检测NEDL2的表达 | 第47-48页 |
| 4.3 免疫组织化学检测NEDL1和NEDL2的表达 | 第48-49页 |
| 4.3.1 免疫组化检测NEDL1的表达 | 第48页 |
| 4.3.2 免疫组化检测NEDL2的表达 | 第48-49页 |
| 4.4 X-gal染色检测NEDL2的表达 | 第49-50页 |
| 4.5 免疫荧光检测NEDL2的表达 | 第50-52页 |
| 4.6 小结 | 第52页 |
| 4.7 讨论 | 第52-53页 |
| 第5章 NEDL2基因敲除小鼠表型分析 | 第53-60页 |
| 5.1 NEDL2~(-/-)小鼠出生后于围产期致死 | 第53-54页 |
| 5.2 NEDL2~(-/-)小鼠体重增长缓慢 | 第54-56页 |
| 5.3 NEDL2~(-/-)小鼠主要组织器官病理学分析 | 第56页 |
| 5.4 NEDL2~(-/-)小鼠血象分析 | 第56-58页 |
| 5.5 小结 | 第58页 |
| 5.6 讨论 | 第58-60页 |
| 第6章 NEDL2调控肠神经系统的发育 | 第60-66页 |
| 6.1 引言 | 第60页 |
| 6.2 NEDL2~(-/-)小鼠肠动力不足 | 第60-62页 |
| 6.3 NEDL2~(-/-)小鼠肠神经系统发育不良 | 第62-64页 |
| 6.4 小结 | 第64-65页 |
| 6.5 讨论 | 第65-66页 |
| 第7章 NEDL2与GDNF-RET信号通路的调控研究 | 第66-76页 |
| 7.1 引言 | 第66页 |
| 7.2 NEDL2~(-/-)小鼠中GDNF-AKT路活性受到抑制 | 第66-70页 |
| 7.3 NEDL2在GDNF-AKT信号通路中的调控机制探究 | 第70-74页 |
| 7.3.1 NEDL2与AKT、S6K、mTOR存在相互作用 | 第71-73页 |
| 7.3.2 NEDL2对AKT、S6K泛素化水平的影响 | 第73-74页 |
| 7.4 小结 | 第74-75页 |
| 7.5 讨论 | 第75-76页 |
| 第8章 NEDL2在肾脏发育过程中的功能探究 | 第76-82页 |
| 8.1 引言 | 第76-77页 |
| 8.2 NEDL2~(-/-)小鼠肾脏发育不良 | 第77-80页 |
| 8.3 小结 | 第80页 |
| 8.4 讨论 | 第80-82页 |
| 第9章 其他工作 | 第82-94页 |
| 9.1 Neddylation修饰 | 第82-85页 |
| 9.2 Smurf2的研究进展 | 第85-88页 |
| 9.3 Smurf2的Neddylation修饰 | 第88-91页 |
| 9.4 小结 | 第91-92页 |
| 9.5 讨论 | 第92-94页 |
| 第10章 讨论与展望 | 第94-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 附录A 基因型鉴定引物 | 第112-113页 |
| 附录B 实时定量PCR引物 | 第113-114页 |
| 附录C 质粒构建相关信息 | 第114-115页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第115-116页 |
