| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 猪传染性胃肠炎病毒概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 TGEV的一般生物学特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 TGEV的分子生物学特征 | 第14-16页 |
| 1.2 TGEV致病机制 | 第16-17页 |
| 1.3 TGEV疫苗研究概述 | 第17-18页 |
| 1.4 宿主细胞信号通路与发病机制 | 第18-20页 |
| 1.5 蛋白-蛋白互作概述 | 第20-21页 |
| 1.5.1 酵母双杂交系统（Y2H）的原理 | 第20-21页 |
| 1.5.2 GST pull-down技术 | 第21页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 第2章 宿主细胞CDNA文库构建及TGEV M蛋白诱饵载体构建及鉴定 | 第23-43页 |
| 2.1 材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 质粒、菌株和细胞 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要实验仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第24-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 宿主细胞cDNA文库构建及鉴定 | 第26-30页 |
| 2.2.2 TGEV M蛋白诱饵载体构建及鉴定 | 第30-35页 |
| 2.3 结果 | 第35-41页 |
| 2.3.1 猪小肠上皮细胞pIECs总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.2 cDNA文库构建及质量检测 | 第36页 |
| 2.3.3 cDNA文库构建及质量检测 | 第36-37页 |
| 2.3.4 诱饵载体pGBKT7-M的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.5 诱饵载体转化酵母菌Y2HGold的鉴定 | 第38页 |
| 2.3.6 诱饵表达载体pGBKT7-M的毒性检测 | 第38-39页 |
| 2.3.7 诱饵载体pGBKT7-M的自激活检测 | 第39-40页 |
| 2.3.8 诱饵蛋白的表达检测 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 第3章 酵母双杂交系统筛选与M蛋白互作的宿主蛋白 | 第43-53页 |
| 3.1 材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 3.1.3 主要实验仪器设备 | 第43-44页 |
| 3.1.4 主要培养基的配制 | 第44页 |
| 3.2 方法 | 第44-47页 |
| 3.2.1 酵母双杂交对照试验 | 第44-45页 |
| 3.2.2 诱饵质粒与cDNA文库酵母双杂交筛选 | 第45-47页 |
| 3.3 结果 | 第47-50页 |
| 3.3.1 对照实验结果 | 第47页 |
| 3.3.2 酵母双杂交第一轮筛选 | 第47-48页 |
| 3.3.3 酵母双杂交第二轮筛选 | 第48页 |
| 3.3.4 酵母双杂交第三轮筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.5 阳性克隆的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.6 测序结果 | 第50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-53页 |
| 第4章 GST PULL-DOWN验证M蛋白与候选蛋白的相互作用 | 第53-72页 |
| 4.1 材料 | 第53-55页 |
| 4.1.1 质粒、菌株和细胞 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第54-55页 |
| 4.2 方法 | 第55-64页 |
| 4.2.1 GST-M融合蛋白的构建 | 第55-60页 |
| 4.2.2 候选蛋白EIF4A2原核表达系统的构建 | 第60-63页 |
| 4.2.3 目的蛋白的捕获 | 第63-64页 |
| 4.3 结果 | 第64-70页 |
| 4.3.1 M基因去信号肽片段的扩增 | 第64页 |
| 4.3.2 重组表达载体pGEX-4T-M的鉴定 | 第64-65页 |
| 4.3.3 GST-M融合蛋白的小量诱导表达 | 第65-66页 |
| 4.3.4 GST-M融合蛋白的纯化 | 第66页 |
| 4.3.5 EIF4A2基因片段的获取 | 第66-67页 |
| 4.3.6 重组表达载体pET-EIF4A2的鉴定 | 第67页 |
| 4.3.7 His-EIF4A2融合蛋白的小量诱导表达 | 第67-68页 |
| 4.3.8 His-EIF4A2融合蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| 4.3.9 目的蛋白的捕获 | 第69-70页 |
| 4.4 讨论 | 第70-71页 |
| 4.5 小结 | 第71-72页 |
| 第5章 全文总结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-83页 |
| 附件 | 第83-85页 |
| 在校期间发表的论文及主持课题 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
