| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 昆虫病原线虫共生菌 | 第14-15页 |
| 1.1.1 昆虫病原线虫共生菌简述 | 第14页 |
| 1.1.2 昆虫病原线虫共生菌的生活史 | 第14-15页 |
| 1.2 昆虫病原线虫共生菌的次级代谢产物 | 第15-16页 |
| 1.2.1 抑菌物质 | 第15-16页 |
| 1.2.2 杀虫蛋白 | 第16页 |
| 1.2.3 抗癌物质 | 第16页 |
| 1.3 昆虫病原线虫共生菌致病基因及作用机制研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 共生菌抗菌物质的编码基因 | 第16-17页 |
| 1.3.2 共生菌杀虫物质编码基因 | 第17页 |
| 1.3.3 共生菌抗菌物质的作用机制 | 第17页 |
| 1.3.4 共生菌杀虫物质的致病机理 | 第17-18页 |
| 1.4 共生菌隐藏天然产物的挖掘及代谢调控 | 第18-19页 |
| 1.5 双组分信号转导系统CpxRA的作用机理 | 第19-22页 |
| 1.5.1 双组分信号转导系统简介 | 第19-20页 |
| 1.5.2 CpxRA双组分信号转导系统 | 第20-21页 |
| 1.5.3 CpxRA双组分信号转导系统功能 | 第21-22页 |
| 1.6 嗜线虫致病杆菌的基因敲除技术 | 第22-23页 |
| 1.6.1 电击转化法 | 第22页 |
| 1.6.2 化学转化法 | 第22-23页 |
| 1.6.3 接合转移的重组敲除 | 第23页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 嗜线虫致病杆菌YL001cpxR基因敲除 | 第25-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 供试菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 培养基 | 第25页 |
| 2.1.4 仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 菌体培养 | 第26页 |
| 2.2.2 细菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.3 cpxR基因上下游同源片段及卡那抗性基因的扩增 | 第26-28页 |
| 2.2.4 融合PCR反应 | 第28页 |
| 2.2.5 自杀载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.6 重组质粒的转化及阳性克隆的鉴定和测序 | 第29页 |
| 2.2.7 YL001与含自杀质粒的大肠杆菌接合转移 | 第29-30页 |
| 2.2.8 二次交换及突变株筛选 | 第30页 |
| 2.3 结果和分析 | 第30-33页 |
| 2.3.1 YL001基因组的提取 | 第30页 |
| 2.3.2 cpxR基因上下游同源片段及卡那抗性基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 基因敲除载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.4 接合与第一轮重组 | 第32页 |
| 2.3.5 第二轮重组与突变株鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 突变株与野生株代谢产物抑菌活性研究 | 第34-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 供试真菌 | 第34页 |
| 3.1.2 供试细菌 | 第34页 |
| 3.1.3 试剂 | 第34页 |
| 3.1.4 培养基 | 第34-35页 |
| 3.1.5 仪器 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 野生株与 ΔcpxR突变菌株胞外代谢物抑菌活性 | 第35-36页 |
| 3.2.2 野生株YL001与 ΔcpxR突变菌株胞外代谢物甲醇提取物的抑菌活性 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 野生株YL001与 ΔcpxR突变株胞外代谢物对5种细菌的抑制作用 | 第36页 |
| 3.3.2 野生株YL001与 ΔcpxR突变株胞外代谢物对15种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用 | 第36-37页 |
| 3.3.3 野生株YL001与 ΔcpxR突变株对对番茄灰霉病的防治效果（活体组织法） | 第37-38页 |
| 3.3.4 野生株YL001与 ΔcpxR突变株胞外代谢物甲醇提取物对番茄灰霉病的防治效果（活体组织法） | 第38-39页 |
| 3.4 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 突变株与野生株代谢差异分析 | 第40-60页 |
| 4.1 试验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.3 培养基 | 第41页 |
| 4.1.4 仪器 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-49页 |
| 4.2.1 野生株YL001与 ΔcpxR突变株培养特征观察 | 第41页 |
| 4.2.2 野生株YL001与 ΔcpxR突变株生长代谢差异分析 | 第41-42页 |
| 4.2.3 野生株YL001与 ΔcpxR突变株主要基因表达差异分析 | 第42-47页 |
| 4.2.4 野生株YL001与 ΔcpxR突菌株代谢谱差异分析 | 第47-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-59页 |
| 4.3.1 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变菌株培养特征分析 | 第49-50页 |
| 4.3.2 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变菌株生长代谢差异分析 | 第50-52页 |
| 4.3.2.1 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变菌株的生长曲线 | 第50页 |
| 4.3.2.2 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变菌株培养过程中营养物质的消耗变化 | 第50-51页 |
| 4.3.2.3 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变菌株不同培养时间发酵液的抑菌活性 | 第51页 |
| 4.3.2.4 野生菌株与 Δcpx R 突变菌株培养过程中 p H 的变化动态 | 第51-52页 |
| 4.3.2.5 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变菌株培养过程中溶氧的变化动态 | 第52页 |
| 4.3.3 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变株主要基因表达差异分析 | 第52-57页 |
| 4.3.4 野生菌株YL001与突变株 ΔcpxR甲醇相主要抑菌物质相对含量 | 第57-58页 |
| 4.3.5 野生菌株YL001与 ΔcpxR突变株乙酸乙酯提取物代谢谱差异分析 | 第58-59页 |
| 4.4 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 ΔcpxR突变菌株在不同pH条件下的培养特性的研究 | 第60-65页 |
| 5.1 试验材料 | 第60页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第60页 |
| 5.1.2 试剂 | 第60页 |
| 5.1.3 培养基 | 第60页 |
| 5.2 方法 | 第60-61页 |
| 5.2.1 共生菌培养 | 第60页 |
| 5.2.2 发酵过程中参数检测 | 第60-61页 |
| 5.2.3 ΔcpxR突变菌株在不同pH条件下抑菌物质相对含量变化分析 | 第61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-64页 |
| 5.3.1 ΔcpxR突变菌株在3种pH条件下的细胞生长状况 | 第61页 |
| 5.3.2 ΔcpxR突变菌株在3种pH条件下营养物质的消耗 | 第61-62页 |
| 5.3.3 ΔcpxR突变菌株在3种pH条件下对枯草芽孢杆菌的抑制作用 | 第62页 |
| 5.3.4 ΔcpxR突变菌株在3种pH条件下培养时pH变化动态 | 第62-63页 |
| 5.3.5 ΔcpxR突变菌株在3种pH条件下培养时溶氧量变化动态 | 第63页 |
| 5.3.6 ΔcpxR突变菌株在3种pH条件下抑菌物质相对含量 | 第63-64页 |
| 5.4 小结 | 第64-65页 |
| 第六章 不同培养方式对 ΔcpxR突变菌株生长与抑菌活性的影响 | 第65-68页 |
| 6.1 试验材料 | 第65页 |
| 6.1.1 供试菌株 | 第65页 |
| 6.1.2 试剂 | 第65页 |
| 6.1.3 培养基 | 第65页 |
| 6.2 方法 | 第65-66页 |
| 6.2.1 种子制备 | 第65页 |
| 6.2.2 摇瓶试验 | 第65页 |
| 6.2.3 发酵罐试验 | 第65页 |
| 6.2.4 发酵过程参数检测 | 第65-66页 |
| 6.3 结果与分析 | 第66-67页 |
| 6.3.1 ΔcpxR突变菌株在摇瓶和发酵罐中细胞生长的变化 | 第66页 |
| 6.3.2 ΔcpxR突变菌株在摇瓶和发酵罐中还原糖含量的变化 | 第66-67页 |
| 6.3.3 ΔcpxR突变菌株在摇瓶和发酵罐中抑菌物质含量的变化 | 第67页 |
| 6.4 小结 | 第67-68页 |
| 第七章 讨论 | 第68-73页 |
| 7.1 基因敲除方法的建立 | 第68页 |
| 7.2 cpxR基因突变可提高X.nematophila的抑菌活性 | 第68-69页 |
| 7.3 cpxR基因突变对主要抑菌物质生物合成基因及相关调节子基因的转录与表达的影响 | 第69-71页 |
| 7.4 pH对 ΔcpxR突变菌株生长代谢有显著的影响 | 第71-72页 |
| 7.5 不同培养方式对 ΔcpxR突变菌株生长代谢有一定的影响 | 第72-73页 |
| 第八章 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简介 | 第90页 |
