| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 1.1 血吸虫病的流行现状及防治难点 | 第14-15页 |
| 1.2 血吸虫的生活史 | 第15-16页 |
| 1.3 血吸虫的体被 | 第16-21页 |
| 1.3.1 血吸虫体被蛋白质组学 | 第18-19页 |
| 1.3.2 血吸虫体被蛋白的研究 | 第19-21页 |
| 1.3.3 血吸虫的葡萄糖摄取与体被 | 第21页 |
| 1.4 RNA干扰技术的应用及局限 | 第21-23页 |
| 1.5 囊泡运输 | 第23-25页 |
| 1.5.1 囊泡运输的过程 | 第23-24页 |
| 1.5.2 SNARE蛋白复合物 | 第24-25页 |
| 1.5.3 VAMP2 | 第25页 |
| 1.6 本研究的总体思路 | 第25-27页 |
| 第二章 SjVAMP2的特征性分析及其重组蛋白的免疫保护效果评估 | 第27-52页 |
| 2.1 引言 | 第27-28页 |
| 2.2 材料 | 第28-29页 |
| 2.2.1 生物材料 | 第28页 |
| 2.2.2 主要试剂和酶 | 第28页 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| 2.2.4 主要试剂配制 | 第29页 |
| 2.3 方法 | 第29-38页 |
| 2.3.1 SjVAMP2的生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.3.2 实时定量PCR分析SjVAMP2在几个不同发育时期虫体内的转录水平 | 第29-31页 |
| 2.3.3 SjVAMP2基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.4 重组质粒pET- 28a(+)-SjVAMP2的原核表达及重组蛋白纯化 | 第33-35页 |
| 2.3.5 rSjVAMP2重组蛋白多克隆抗体制备及免疫原性分析 | 第35页 |
| 2.3.6 SjVAMP2蛋白在虫体的定位分析 | 第35-37页 |
| 2.3.7 重组蛋白rSjVAMP2诱导小鼠抗血吸虫感染的免疫保护效果评估 | 第37-38页 |
| 2.4 结果 | 第38-49页 |
| 2.4.1 日本血吸虫SjVAMP2基因的生物信息学分析 | 第38页 |
| 2.4.2 SjVAMP2在不同发育时期虫体中的转录水平分析 | 第38页 |
| 2.4.3 吡喹酮对SjVAMP2转录水平的影响 | 第38页 |
| 2.4.4 SjVAMP2基因的克隆及原核表达 | 第38-46页 |
| 2.4.5 SjVAMP2蛋白具有较好的免疫原性 | 第46-47页 |
| 2.4.6 SjVAMP2蛋白在虫体中的定位 | 第47-48页 |
| 2.4.7 rSjVAMP2重组蛋白诱导小鼠抗日本血吸虫感染的免疫保护效果 | 第48-49页 |
| 2.4.8 rSjVAMP2重组蛋白诱导小鼠产生的特异性抗体分析 | 第49页 |
| 2.5 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 SjVAMP2的生物学功能初探 | 第52-72页 |
| 3.1 引言 | 第52-53页 |
| 3.2 材料和方法 | 第53-58页 |
| 3.2.1 材料 | 第53页 |
| 3.2.2 方法 | 第53-58页 |
| 3.3 结果 | 第58-69页 |
| 3.3.1 siRNA浸泡转染效率分析 | 第58页 |
| 3.3.2 RNAi引起SjVAMP2的沉默效果 | 第58页 |
| 3.3.3 SjVAMP2沉默对虫体活力及形态的影响 | 第58-61页 |
| 3.3.4 SjVAMP2沉默引起的虫体体被表膜及体被结构的变化 | 第61-64页 |
| 3.3.5 SjVAMP2沉默对葡萄糖摄取相关基因转录水平的影响 | 第64页 |
| 3.3.6 SjVAMP2沉默对虫体葡萄糖摄取能力及雌虫产卵的影响 | 第64-65页 |
| 3.3.7 体内干扰SjVAMP2表达对虫体发育及雌虫产卵的影响 | 第65-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-72页 |
| 第四章 利用酵母双杂交技术筛选Sj VAMP2的互作蛋白 | 第72-88页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 材料和方法 | 第72-78页 |
| 4.2.1 材料 | 第72-73页 |
| 4.2.2 方法 | 第73-78页 |
| 4.3 结果 | 第78-84页 |
| 4.3.1 成功构建了pGBKT7-SjVAMP2诱饵质粒 | 第78页 |
| 4.3.2 重组质粒p GBKT7-SjVAMP2转化Y187酵母菌的PCR鉴定 | 第78-81页 |
| 4.3.3 诱饵pGBKT7-SjVAMP2酵母菌株的自激活活性检测 | 第81页 |
| 4.3.4 诱饵pGBKT7-SjVAMP2转染的酵母菌株的细胞毒性检测 | 第81页 |
| 4.3.5 诱饵pGBKT7-SjVAMP2重组质粒在Y187菌株中的蛋白表达 | 第81-83页 |
| 4.3.6 32d日本血吸虫酵母双杂交cDNA文库质量检测 | 第83页 |
| 4.3.7 酵母双杂交杂交效率及阳性质粒的分析 | 第83-84页 |
| 4.4 讨论 | 第84-88页 |
| 第五章 全文总结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简历 | 第102-104页 |
