| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第15-32页 |
| 1.1 流感病毒的形态和结构 | 第15-17页 |
| 1.2 病毒的复制 | 第17-20页 |
| 1.2.1 病毒的吸附和侵入 | 第17页 |
| 1.2.2 病毒vRNP的入核 | 第17-18页 |
| 1.2.3 病毒基因组的转录和复制 | 第18-19页 |
| 1.2.4 病毒vRNP的出核 | 第19页 |
| 1.2.5 病毒的组装和出芽 | 第19-20页 |
| 1.3 流感病毒M2蛋白 | 第20-23页 |
| 1.3.1 M2蛋白功能 | 第20-23页 |
| 1.3.2 M2蛋白与宿主因子 | 第23页 |
| 1.4 TRAPP系统结构和功能 | 第23-25页 |
| 1.4.1 TRAPP复合物结构 | 第24页 |
| 1.4.2 TRAPP复合物的功能 | 第24-25页 |
| 1.5 筛选和鉴定蛋白相互作用的常用方法 | 第25-30页 |
| 1.5.1 酵母双杂交技术(Yeast two-hybrid system,Y2H) | 第25-26页 |
| 1.5.2 细菌双杂交技术(Bacterial two-hybrid system, BACTH) | 第26-27页 |
| 1.5.3 噬菌体展示技术(Phage display techniques, PDT) | 第27页 |
| 1.5.4 串联亲和纯化技术(Tandem affinity purification, TAP) | 第27-28页 |
| 1.5.5 免疫共沉淀技术(Co-immunoprecipitation, Co-IP) | 第28页 |
| 1.5.6 GST pull-down技术 | 第28页 |
| 1.5.7 荧光共振能量转移技术(Fluorescence resonance energy transfer, FRET) | 第28-29页 |
| 1.5.8 双分子荧光互补技术( Bimolecular fluorescence complementation , BIFC) | 第29页 |
| 1.5.9 RNA干扰技术 | 第29-30页 |
| 1.6 本实验研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 酵母双杂交系统筛选与流感病毒M2蛋白相互作用宿主因子 | 第32-39页 |
| 2.1 材料方法 | 第32-35页 |
| 2.1.1 实验仪器和相关试剂 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株、酵母文库和质粒 | 第32页 |
| 2.1.3 引物 | 第32页 |
| 2.1.4 质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.1.5 诱饵菌株的构建 | 第33-34页 |
| 2.1.6 诱饵质粒自激活验证 | 第34页 |
| 2.1.7 酵母文库筛选 | 第34-35页 |
| 2.1.8 酵母回交验证 | 第35页 |
| 2.2 结果 | 第35-37页 |
| 2.2.1 诱饵质粒自激活验证结果 | 第35-36页 |
| 2.2.2 酵母双杂交筛选结果 | 第36页 |
| 2.2.3 酵母双杂交回交验证结果 | 第36-37页 |
| 2.3 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 TRAPPC6AΔ 蛋白调控流感病毒复制及其调控机制 | 第39-64页 |
| 3.1 材料方法 | 第39-43页 |
| 3.1.1 实验仪器和相关试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 细胞、质粒 | 第39-40页 |
| 3.1.3 引物 | 第40页 |
| 3.1.4 质粒的构建 | 第40页 |
| 3.1.5 细胞转染 | 第40页 |
| 3.1.6 免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| 3.1.7 Western Blot | 第41页 |
| 3.1.8 激光共聚焦 | 第41页 |
| 3.1.9 RNAi实验 | 第41页 |
| 3.1.10 细胞过表达实验 | 第41-42页 |
| 3.1.11 病毒拯救 | 第42页 |
| 3.1.12 病毒滴定 | 第42页 |
| 3.1.13 病毒生长曲线测定 | 第42-43页 |
| 3.1.14 小鼠实验 | 第43页 |
| 3.1.15 病毒粒子蛋白分布检测 | 第43页 |
| 3.1.16 流式细胞仪检测 | 第43页 |
| 3.1.17 数据分析 | 第43页 |
| 3.2 结果 | 第43-60页 |
| 3.2.1 激光共聚焦检测M2与TRAPPC6A蛋白的共定位 | 第43-44页 |
| 3.2.2 免疫共沉淀检测M2蛋白与TRAPPC6A蛋白相互作用 | 第44-46页 |
| 3.2.3 免疫共沉淀检测M1蛋白与TRAPPC6A蛋白相互作用 | 第46-47页 |
| 3.2.4 免疫共沉淀检测M2蛋白与TRAPPC3蛋白相互作用 | 第47-48页 |
| 3.2.5 检测M2蛋白与TRAPPC6A蛋白相互作用功能区段 | 第48-50页 |
| 3.2.6 M2蛋白96位氨基酸残基对相互作用影响 | 第50-51页 |
| 3.2.7 细胞内源性TRAPPC6A蛋白检测 | 第51-52页 |
| 3.2.8 TRAPPC6A/TRAPPC6AΔ 与流感病毒M2蛋白相互作用 | 第52-53页 |
| 3.2.9 RNA干扰实验结果 | 第53页 |
| 3.2.10 细胞过表达实验结果 | 第53-54页 |
| 3.2.11 病毒拯救实验结果 | 第54页 |
| 3.2.12 病毒粒子蛋白含量结果 | 第54-55页 |
| 3.2.13 病毒生长曲线 | 第55-56页 |
| 3.2.14 小鼠实验结果 | 第56页 |
| 3.2.15 TRAPPC6AΔ 蛋白对病毒M2蛋白运输到细胞膜的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.16 TRAPPC6AΔ 蛋白调节M2蛋白运输的动态过程 | 第57-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-64页 |
| 第四章 全文结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 附录 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简历 | 第81页 |
