| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-28页 |
| 1.1 前言 | 第14-15页 |
| 1.2 c-di-GMP在微生物中的代谢 | 第15-19页 |
| 1.2.1 c-di-GMP的合成 | 第16-18页 |
| 1.2.2 c-di-GMP在微生物中的降解 | 第18-19页 |
| 1.2.3 同时含有GGDEF和EAL结构域的蛋白质 | 第19页 |
| 1.3 胞内c-di-GMP的调控 | 第19-20页 |
| 1.3.1 GGDEF和EAL连接的相互作用调节 | 第19-20页 |
| 1.3.2 酶的细胞定位来调节c-di-GMP | 第20页 |
| 1.3.3 dgc和pde基因表达调控 | 第20页 |
| 1.4 c-di-GMP在微生物中的作用机制 | 第20-25页 |
| 1.4.1 c-di-GMP的生物学功能 | 第21-22页 |
| 1.4.2 细菌c-di-GMP调控效应器 | 第22-24页 |
| 1.4.3 核糖体开关 | 第24-25页 |
| 1.4.4 其他种类的c-di-GMP受体 | 第25页 |
| 1.5 立题依据和技术路线 | 第25-28页 |
| 1.5.1 立题依据 | 第25-27页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第27-28页 |
| 2 实验材料和方法 | 第28-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.3 抗生素 | 第29页 |
| 2.1.4 酶类、生化试剂和试剂盒 | 第29-30页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA、质粒DNA的提取方法 | 第31页 |
| 2.2.2 细菌总RNA提取方法 | 第31页 |
| 2.2.3 基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 2.2.5 PCR产物与载体连接用于测序 | 第32-33页 |
| 2.2.6 酶切及连接反应 | 第33-34页 |
| 2.2.7 三亲结合 | 第34-35页 |
| 2.2.8 生长曲线测定 | 第35页 |
| 2.2.9 c-di-GMP测定 | 第35-37页 |
| 2.2.10 生物膜实验 | 第37页 |
| 2.2.11 固氮酶活的测定 | 第37-38页 |
| 2.2.12 RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.13 RNA反转成cDNA | 第39页 |
| 2.2.14 实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 2.2.15 趋化实验 | 第40页 |
| 2.2.16 鞭毛的透射电子显微镜观察 | 第40-41页 |
| 2.2.17 外源c-di-GMP添加实验 | 第41页 |
| 2.3 数据库 | 第41-42页 |
| 2.4 应用软件 | 第42-43页 |
| 3 结果分析 | 第43-61页 |
| 3.1 固氮施氏假单胞菌A1501基因组分析 | 第43页 |
| 3.2 SadC蛋白结构和序列分析 | 第43-45页 |
| 3.2.1 P. stutzeri A1501中SadC蛋白的结构分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 P. stutzeri A1501 SadC同源蛋白系统发育进化分析 | 第44-45页 |
| 3.3 BifA蛋白结构和序列分析 | 第45-47页 |
| 3.3.1 P. stutzeri A1501中BifA蛋白的结构分析 | 第45-46页 |
| 3.3.2 P.stutzeri A1501 BifA同源蛋白系统发育进化分析 | 第46-47页 |
| 3.4 添加外源c-di-GMP对A1501生物膜形成的影响 | 第47页 |
| 3.5 sadC突变株和sad C过表达株的表型鉴定 | 第47-54页 |
| 3.5.1 重组载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.5.2 sadC功能缺失突变株和sad C过表达株的构建 | 第49-50页 |
| 3.5.3 生长曲线的测定 | 第50-51页 |
| 3.5.4 c-di-GMP含量的测定 | 第51页 |
| 3.5.5 生物膜测定 | 第51-52页 |
| 3.5.6 趋化能力的测定 | 第52-53页 |
| 3.5.7 鞭毛透射电镜实验 | 第53页 |
| 3.5.8 sadC突变对固氮酶活的影响 | 第53-54页 |
| 3.6 bifA突变株和bifA功能回补株的表型鉴定 | 第54-61页 |
| 3.6.1 重组载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.6.2 bifA功能缺失突变株和bifA功能回补株的构建 | 第55-57页 |
| 3.6.3 生长曲线的测定 | 第57页 |
| 3.6.4 c-di-GMP含量的测定 | 第57-58页 |
| 3.6.5 生物膜测定 | 第58-59页 |
| 3.6.6 趋化能力的测定 | 第59页 |
| 3.6.7 透射电镜实验 | 第59-60页 |
| 3.6.8 bifA突变对固氮酶活的影响 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 个人简历 | 第72页 |
