| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 半胱氨酸脱硫酶的结构研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 半胱氨酸脱硫酶脱硫机制研究 | 第11-12页 |
| 1.3 硫原子的转移 | 第12页 |
| 1.4 半胱氨酸脱硫酶的功能介绍 | 第12-17页 |
| 1.4.1 用于铁硫簇的合成 | 第12-13页 |
| 1.4.2 与铁硫簇相关的含硫生物分子的合成 | 第13页 |
| 1.4.3 tRNA硫修饰 | 第13-14页 |
| 1.4.4 硫胺素的合成 | 第14-15页 |
| 1.4.5 DNA的磷硫酰化修饰 | 第15-16页 |
| 1.4.6 喋呤型钼辅因子的合成 | 第16-17页 |
| 1.5 课题研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 dndA及突变体质粒的构建 | 第18-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 质粒、模板及工程菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 质粒构建中主要仪器及试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.3 实验结果 | 第21-22页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第22-23页 |
| 第三章 DndA及其突变体蛋白的表达纯化 | 第23-37页 |
| 3.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 3.1.1 实验相关仪器 | 第23页 |
| 3.1.2 试验相关试剂配制 | 第23-24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 3.2.1 转化表达型细胞BL_(21)(DE_3) | 第24页 |
| 3.2.2 小量表达优化 | 第24-25页 |
| 3.2.3 大量表达及纯化 | 第25-28页 |
| 3.2.4 蛋白浓度的测定 | 第28页 |
| 3.3 实验结果 | 第28-35页 |
| 3.3.1 DndA(WT)蛋白的表达纯化 | 第28-31页 |
| 3.3.2 DndA(C/S)蛋白的表达纯化 | 第31-35页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 DndA及其突变体蛋白的表征 | 第37-41页 |
| 4.1 实验材料 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 4.2.1 圆二色谱（即CD谱）的表征 | 第37页 |
| 4.2.2 分析型（Analysis）75的表征 | 第37-38页 |
| 4.3 实验结果 | 第38-39页 |
| 4.3.1 CD谱结果分析 | 第38-39页 |
| 4.3.2 Analysis 75谱图分析 | 第39页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 部分标记DndA样品的制备 | 第41-61页 |
| 5.1 前言 | 第41-45页 |
| 5.1.1 部分标记简介 | 第41-42页 |
| 5.1.2 部分标记原理 | 第42-43页 |
| 5.1.3 DndA部分标记策略的选择及操作方法 | 第43-44页 |
| 5.1.4 DndA部分标记的研究目的及意义 | 第44-45页 |
| 5.2 DndA部分标记PTS策略的体内表达 | 第45-52页 |
| 5.2.1 DndA部分标记PTS策略体内表达质粒的构建策略 | 第45页 |
| 5.2.2 DndA部分标记PTS策略体内表达质粒的构建 | 第45-47页 |
| 5.2.3 DndA部分标记PTS策略体内表达重组质粒的表达检测 | 第47-48页 |
| 5.2.4 DndA部分标记PTS策略体内表达的连接条件优化 | 第48-49页 |
| 5.2.5 DndA部分标记PTS策略体内的大量表达及初步纯化 | 第49-51页 |
| 5.2.6 小结与讨论 | 第51-52页 |
| 5.3 DndA部分标记PTS策略的体外表达 | 第52-55页 |
| 5.3.1 DndA部分标记PTS策略的体外表达质粒构建策略 | 第52页 |
| 5.3.2 碳端加His标签的dndA_(268-380)-pSKBAD2质粒的构建 | 第52页 |
| 5.3.3 dndA_(1-260)-pSKDUET01质粒的表达与初步纯化 | 第52-54页 |
| 5.3.4 碳端加His标签的dndA_(268-380)-pSKBAD2质粒的表达与初步纯化 | 第54页 |
| 5.3.5 小结与讨论 | 第54-55页 |
| 5.4 DndA部分标记的PTS策略中氮端质粒的改造 | 第55-56页 |
| 5.4.1 dndA_(1-260)-pSKDUET01的改造策略 | 第55-56页 |
| 5.4.2 氮端带Flag标签的dndA_(1-260)-pSKDUET01质粒的构建 | 第56页 |
| 5.4.3 小结与讨论 | 第56页 |
| 5.5 以pET28a为载体的dndA分段表达质粒的构建 | 第56-61页 |
| 5.5.1 以pET28a为载体的dndA分段表达质粒构建策略 | 第56-57页 |
| 5.5.2 以pET28a为载体的dndA分段表达质粒的构建 | 第57页 |
| 5.5.3 dndA_(1-260)-pET28a质粒、氮端加Flag标签的dndA_(1-260)-pET28a质粒的表达与初步纯化 | 第57-59页 |
| 5.5.4 dndA_(268-380)-pET28a重组质粒的表达与初步纯化 | 第59-60页 |
| 5.5.5 小结与讨论 | 第60-61页 |
| 第六章 总结与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间研究成果 | 第68-69页 |
| 附录B | 第69-72页 |
