| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 一、前言 | 第11-25页 |
| 1.1 马铃薯及马铃薯晚疫病 | 第11-15页 |
| 1.1.1 马铃薯 | 第11页 |
| 1.1.2 马铃薯晚疫病 | 第11-14页 |
| 1.1.2.1 马铃薯晚疫病的分类地位 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 马铃薯晚疫病生活史 | 第12-14页 |
| 1.1.3 马铃薯晚疫病防控方法 | 第14-15页 |
| 1.2 病原菌入侵方式与植物防御体系 | 第15-21页 |
| 1.2.1 病原菌入侵植物细胞 | 第15页 |
| 1.2.2 植物防御体系 | 第15-18页 |
| 1.2.3 调控植物防御的相关激素信号途径 | 第18-21页 |
| 1.3 拟南芥广谱抗病基因RPW8 | 第21-24页 |
| 1.3.1 RPW8的结构特点 | 第21-22页 |
| 1.3.2 RPW8蛋白的功能研究及其定位 | 第22-23页 |
| 1.3.3 RPW8基因在其他作物上的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 二、材料与方法 | 第25-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验材料与供试菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 载体与细菌菌株 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 载体构建 | 第27页 |
| 2.2.2 三亲融合 | 第27-28页 |
| 2.2.3 转基因植株获得 | 第28-29页 |
| 2.2.3.1 植物转化 | 第28页 |
| 2.2.3.2 阳性鉴定 | 第28页 |
| 2.2.3.3 薯块获得 | 第28-29页 |
| 2.2.4 转基因株系基因表达量检测 | 第29页 |
| 2.2.4.1 植物总RNA提取 | 第29页 |
| 2.2.4.2 反转录PCR | 第29页 |
| 2.2.5 晚疫病菌培养与收集 | 第29页 |
| 2.2.6 晚疫病菌侵染实验 | 第29-32页 |
| 2.2.6.1 离体叶片侵染实验 | 第29-30页 |
| 2.2.6.2 盆苗侵染实验 | 第30-32页 |
| 三、结果及讨论 | 第32-47页 |
| 3.1 载体构建 | 第32-34页 |
| 3.1.1 构建载体 | 第32页 |
| 3.1.2 克隆载体阳性检测 | 第32-33页 |
| 3.1.3 获得携带阳性克隆载体的农杆菌 | 第33-34页 |
| 3.2 转基因株系获得 | 第34-36页 |
| 3.2.1 转化子获得 | 第34页 |
| 3.2.2 阳性株鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.3 转基因株系中RPW8.1基因表达量检测 | 第35-36页 |
| 3.3 晚疫病侵染实验 | 第36-39页 |
| 3.3.1 离体叶片侵染实验 | 第36-37页 |
| 3.3.2 盆苗侵染实验 | 第37-39页 |
| 3.4 相关基因表达量分析 | 第39-44页 |
| 3.4.1 RPW8.1转基因株系中SA信号途径已被激活 | 第39-40页 |
| 3.4.2 P.infestans侵染后目的基因RPW8.1上调表达 | 第40-41页 |
| 3.4.3 P.infestans侵染后SA信号途径相关基因表达量升高 | 第41-42页 |
| 3.4.4 P.infestans侵染后ET信号途径被激活 | 第42-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-47页 |
| 3.5.1 RPW8.1转基因株系未获得对P infestans的抗性 | 第44-45页 |
| 3.5.2 CaMV35S组成型启动RPW8.1基因在P.infestans侵染后表达水平仍会继续上调 | 第45页 |
| 3.5.3 展望 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-59页 |
| 附录1：引物列表 | 第51-52页 |
| 附录2：植物转化方案 | 第52-53页 |
| 附录3：农杆菌三亲融合 | 第53页 |
| 附录4：CTAB法提取植物DNA | 第53-54页 |
| 附录5：RNA提取方法 | 第54页 |
| 附录6：晚疫病菌培养、活化及孢子囊悬液收集方法 | 第54-55页 |
| 附录7：反应体系与反应条件 | 第55-56页 |
| 附录8：培养基及缓冲液配方 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
