| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 木质纤维素生物质 | 第13-14页 |
| 1.1.1 木质纤维素生物质简介 | 第13页 |
| 1.1.2 木质纤维素的组成及其性质 | 第13-14页 |
| 1.2 纤维素酶 | 第14-15页 |
| 1.2.1 纤维素酶的组成 | 第14页 |
| 1.2.2 纤维素酶的水解机制 | 第14-15页 |
| 1.3 半纤维素酶 | 第15-16页 |
| 1.3.1 半纤维素酶的组成 | 第15页 |
| 1.3.2 半纤维素酶的水解机制 | 第15-16页 |
| 1.4 丝状真菌遗传转化系统 | 第16-21页 |
| 1.4.1 筛选标记 | 第16-19页 |
| 1.4.2 转化方法 | 第19-21页 |
| 1.5 丝状真菌基因打靶技术 | 第21-24页 |
| 1.5.1 丝状真菌基因打靶技术的原理 | 第21-22页 |
| 1.5.2 无痕敲除系统的策略 | 第22-23页 |
| 1.5.3 丝状真菌基因打靶技术的发展 | 第23-24页 |
| 1.6 课题的研究意义及内容 | 第24-27页 |
| 第2章 材料与方法 | 第27-33页 |
| 2.1 实验仪器 | 第27页 |
| 2.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.3 酶与分子试剂 | 第28-29页 |
| 2.4 菌株与质粒 | 第29-30页 |
| 2.5 基础的实验方法 | 第30-33页 |
| 第3章 柄篮状菌原生质体的制备和再生条件的优化 | 第33-47页 |
| 3.1 前言 | 第33页 |
| 3.2 实验部分 | 第33-36页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-46页 |
| 3.3.1 原生质体的形态 | 第36-37页 |
| 3.3.2 制备材料对原生质体制备与再生的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.3 菌龄对原生质体制备与再生的影响 | 第38-40页 |
| 3.3.4 渗透压稳定剂对原生质体制备与再生的影响 | 第40-42页 |
| 3.3.5 不同酶的种类和配比对原生质体制备与再生的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.6 酶解时间对原生质体制备与再生的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.7 不同再生方式对原生质体再生的影响 | 第45-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 第4章 T.reesei木糖苷酶基因的克隆及在柄篮状菌EMM里的过量表达 | 第47-63页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 实验部分 | 第47-55页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第47-50页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第50-55页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第55-61页 |
| 4.3.1 里氏木霉C30β-木糖苷酶基因的克隆 | 第55-57页 |
| 4.3.2 柄蓝状菌EMMβ-木糖苷酶基因的克隆 | 第57-58页 |
| 4.3.3 转化质粒 5,3 region-pcptcbh2-XS的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.4 转化结果及转化子的PCR验证 | 第59-60页 |
| 4.3.5 转化子的 β-木糖苷酶活和滤纸酶活的检测 | 第60-61页 |
| 4.4 小结 | 第61-63页 |
| 第5章 柄篮状菌pyrF基因的克隆和pyrF缺失菌株的构建 | 第63-73页 |
| 5.1 前言 | 第63-64页 |
| 5.2 实验部分 | 第64-66页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第64页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第64-66页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第66-70页 |
| 5.3.1 90%致死率紫外线照射时间的确定 | 第66页 |
| 5.3.2 5-FOA最小抑制浓度的确定 | 第66-67页 |
| 5.3.3 尿嘧啶营养缺陷型菌株的筛选 | 第67-68页 |
| 5.3.4 原始菌基因组DNA的提取 | 第68页 |
| 5.3.5 pyrG基因突变株的筛选 | 第68-69页 |
| 5.3.6 基于pyrF转化体系的鉴定 | 第69-70页 |
| 5.4 小结 | 第70-73页 |
| 第6章 利用pyrF基因敲除盒进行连续基因敲除 | 第73-83页 |
| 6.1 前言 | 第73-74页 |
| 6.2 实验部分 | 第74-76页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第74-75页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第75-76页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第76-80页 |
| 6.3.1 可循环利用标记基因盒A-pyrF的构建 | 第76-77页 |
| 6.3.2 A-pyrF中间转化子的PCR鉴定 | 第77-78页 |
| 6.3.3 A-pyrF删除转化子的筛选 | 第78-79页 |
| 6.3.4 A-pyrF删除转化子的PCR鉴定 | 第79-80页 |
| 6.4 小结 | 第80-83页 |
| 第7章 结论与建议 | 第83-87页 |
| 7.1 结论 | 第83-85页 |
| 7.2 本文主要创新点 | 第85页 |
| 7.3 建议 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 攻读硕士期间已发表的论文 | 第95-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
