| 摘要 | 第7-8页 |
| 一 前言 | 第8-18页 |
| 1. MicroRNA(miRNA)的概况 | 第8-13页 |
| 1.1 植物miRNA的生物合成 | 第8-9页 |
| 1.2 miRNA的作用方式 | 第9页 |
| 1.3 植物miRNA的生物学功能 | 第9-12页 |
| 1.3.1 miRNA与植物组织器官的形成 | 第10页 |
| 1.3.2 miRNA与植物的抗逆抗病性 | 第10-11页 |
| 1.3.3 miRNA与植物的激素响应 | 第11页 |
| 1.3.4 miRNA与植物的花青素代谢 | 第11-12页 |
| 1.4 miRNA828的研究进展 | 第12-13页 |
| 2. miRNA靶基因的鉴定方法 | 第13页 |
| 3. MYB类转录因子 | 第13-16页 |
| 3.1 MYB转录因子的分类 | 第14页 |
| 3.2 MYB转录因子的功能 | 第14-16页 |
| 3.2.1 MYB转录因子与植物的抗逆性 | 第14-16页 |
| 3.2.2 MYB转录因子与花青素代谢 | 第16页 |
| 4. 本研究的目的与意义 | 第16-18页 |
| 二 材料与方法 | 第18-30页 |
| 1. 材料、仪器及试剂 | 第18-19页 |
| 1.1 材料及培养 | 第18页 |
| 1.2 仪器及试剂 | 第18页 |
| 1.3 主要溶液及试剂配制 | 第18-19页 |
| 2. 方法 | 第19-30页 |
| 2.1 miR828靶基因的RLM-5'Race鉴定 | 第19-22页 |
| 2.1.1 RNA提取及检测 | 第19-20页 |
| 2.1.2 cDNA合成 | 第20页 |
| 2.1.3 RLM-5'Race及电泳检测 | 第20-21页 |
| 2.1.4 纯化及回收 | 第21页 |
| 2.1.5 连接与转化 | 第21-22页 |
| 2.1.6 质粒PCR检测 | 第22页 |
| 2.1.7 测序及序列比对分析 | 第22页 |
| 2.2 SlyMYB7-Like克隆及生物信息学分析 | 第22-24页 |
| 2.2.1 SlyMYB7-Like基因的克隆 | 第23页 |
| 2.2.2 SlyMYB7-Like基因结构分析 | 第23页 |
| 2.2.3 SlyMYB7-Like同源性分析 | 第23页 |
| 2.2.4 SlyMYB7-Like进化树分析 | 第23-24页 |
| 2.2.5 SlyMYB7-Like启动子分析 | 第24页 |
| 2.3 番茄SlyMYB7-Like基因表达模式分析 | 第24页 |
| 2.3.1 番茄植株不同组织RNA的提取 | 第24页 |
| 2.3.2 番茄植株不同组织SlyMYB7-Like的表达分析 | 第24页 |
| 2.4 PC3301-SlyMYB7-Like植物过表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.4.1 SlyMYB7-Like和PC3301载体的双酶切 | 第24-25页 |
| 2.4.2 连接、转化及菌液PCR鉴定 | 第25页 |
| 2.4.3 重组质粒提取 | 第25页 |
| 2.4.5 PC3301-SlyMYB7-Like酶切鉴定 | 第25页 |
| 2.5 农杆菌侵染获得转基因拟南芥 | 第25-26页 |
| 2.5.1 农杆菌GV3101感受态细胞的制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.5.2 农杆菌对野生型拟南芥的侵染 | 第26页 |
| 2.6 SlyMYB7-Like过表达转基因拟南芥的筛选及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.6.1 转基因拟南芥的筛选 | 第26页 |
| 2.6.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.7 SlyMYB7-Like在不同转基因株系中表达量检测 | 第27页 |
| 2.8 SlyMYB7-Like功能的初步分析 | 第27-30页 |
| 2.8.1 SlyMYB7-Like转基因拟南芥的花青素 | 第28页 |
| 2.8.2 SlyMYB7-Like转基因拟南芥抗旱性分析 | 第28-30页 |
| 三 结果与分析 | 第30-44页 |
| 1. miR828靶基因RLM-5'Race鉴定结果 | 第30-32页 |
| 1.1 番茄RNA质量检测 | 第30页 |
| 1.2 番茄miR828靶基因的鉴定 | 第30-32页 |
| 1.2.1 SlyMYB7-Like的鉴定结果 | 第30-31页 |
| 1.2.2 Sly-EIN2的鉴定结果 | 第31-32页 |
| 2. SlyMYB7-Like基因的克隆及生物信息学分析 | 第32-36页 |
| 2.1 SlyMYB7-Like基因的克隆及比对分析 | 第32-33页 |
| 2.1.1 SlyMYB7-Like基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.1.2 SlyMYB7-Like基因测序结果分析 | 第33页 |
| 2.2 SlyMYB7-Like的结构分析 | 第33-34页 |
| 2.3 SlyMYB7-Like蛋白的同源性分析 | 第34-35页 |
| 2.4 SlyMYB7-Like的进化树分析 | 第35页 |
| 2.5 SlyMYB7-Like的启动子区分析 | 第35-36页 |
| 3. SlyMYB7-Like基因表达模式分析 | 第36页 |
| 4. PC3301-SlyMYB7-Like植物过表达载体的构建及酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 5. SlyMYB7-Like转基因拟南芥的鉴定 | 第37-39页 |
| 5.1 GUS染色鉴定 | 第37-38页 |
| 5.2 PCR鉴定 | 第38页 |
| 5.3 SlyMYB7-Like转基因拟南芥株系中基因的表达量 | 第38-39页 |
| 6. SlyMYB7-Like的功能分析 | 第39-44页 |
| 6.1 SlyMYB7-Like过表达转基因拟南芥的表型分析 | 第39-40页 |
| 6.2 不同转基因拟南芥株系花青素含量的测定 | 第40-41页 |
| 6.3 转基因拟南芥花青素相关酶基因的表达分析 | 第41-42页 |
| 6.4 SlyMYB7-Like转基因拟南芥的抗旱性分析 | 第42-44页 |
| 6.4.1 转基因拟南芥离体叶片失水率分析 | 第42页 |
| 6.4.2 转基因拟南芥MDA含量、POD和CAT酶活性的分析 | 第42-44页 |
| 四 讨论 | 第44-47页 |
| 1. 番茄miR828靶基因SlyMYB7-like | 第44-45页 |
| 2. 番茄花青素合成过程中的生物调节因子 | 第45页 |
| 3. miR828与植物的抗旱性 | 第45-47页 |
| 五 结论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| Abstract | 第57页 |
| 致谢 | 第59页 |
