| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| ·植物miRNAs的研究进展 | 第13-16页 |
| ·植物韧皮部汁液miRNA的研究进展 | 第16-18页 |
| ·MiR482的研究进展 | 第18-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-41页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株与载体 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·引物 | 第22-24页 |
| ·方法 | 第24-41页 |
| ·MiRNAs基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·桑树叶片RNA的提取 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·目的片段的回收 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第26页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接、转化 | 第26-27页 |
| ·序列测定 | 第27页 |
| ·MiRNAs植物表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·质粒的酶切和目的片段回收 | 第28页 |
| ·MiRNA植物表达载体构建 | 第28页 |
| ·转miRNAs基因拟南芥的获得 | 第28-29页 |
| ·农杆菌GV3101感受态细胞的转化 | 第28-29页 |
| ·拟南芥的无土栽培 | 第29页 |
| ·拟南芥的侵染与筛选鉴定 | 第29页 |
| ·转基因拟南芥中桑树miRNAs基因表达的Northern-blot分析 | 第29-35页 |
| ·Trizol法提取拟南芥总RNA | 第29-30页 |
| ·RNA的甲醛变性凝胶电泳 | 第30页 |
| ·转膜 | 第30-31页 |
| ·探针制备 | 第31-32页 |
| ·DIG标记有效性检测 | 第32-34页 |
| ·Northern杂交 | 第34-35页 |
| ·转基因拟南芥中桑树miRNAs成熟体的荧光定量PCR检测 | 第35-36页 |
| ·MiRNA的反转录 | 第35页 |
| ·MiRNA的cDNA合成 | 第35-36页 |
| ·MiRNAs的荧光定量PCR | 第36页 |
| ·桑树韧皮部汁液miRNAs的生物学功能分析 | 第36-37页 |
| ·转基因拟南芥的盐胁迫处理 | 第36页 |
| ·Pst DC3000接种拟南芥 | 第36页 |
| ·胼胝质染色 | 第36-37页 |
| ·Pst DC3000的cfu值测定 | 第37页 |
| ·Mul-miR482的组织表达特异性分析 | 第37-41页 |
| ·桑树叶片DNA的提取 | 第37-38页 |
| ·Tail-PCR扩增miRNA基因的启动子 | 第38-39页 |
| ·Mul-miR482启动子植物表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·GUS染色方法 | 第40页 |
| ·拟南芥的微嫁接实验 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-64页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR482基因的克隆与植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·桑树韧皮汁液mul-miR482基因的克隆 | 第41页 |
| ·桑树韧皮部汁液MulMIR482基因植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR482的生物功能分析 | 第43-49页 |
| ·转MulMIR482拟南芥的获得与鉴定 | 第43页 |
| ·转基因拟南芥中mul-miR482的表达分析 | 第43-44页 |
| ·转基因拟南芥中mul-miR482前体的Northern blot分析 | 第43-44页 |
| ·转基因拟南芥中mul-miR482成熟体的检测 | 第44页 |
| ·转桑树MulMIR482拟南芥的表型分析 | 第44页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR482对植物耐盐能力的影响 | 第44-46页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR482影响植物对Pst DC3000的抗性 | 第46-49页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR482的组织表达特性分析 | 第49-55页 |
| ·桑树MulMIR482启动子的克隆与分析 | 第49-52页 |
| ·桑树MulMIR482启动子的活性分析 | 第52-53页 |
| ·Mul-miR482在桑树中的组织表达特性分析 | 第53-54页 |
| ·Mul-miR482的可运输性分析 | 第54-55页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR58基因的克隆与植物表达载体的构建 | 第55-57页 |
| ·Mul-miR58基因的克隆 | 第55-56页 |
| ·桑树MulMIR58植物表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·桑树韧皮部汁液mul-miR58的生物功能分析 | 第57-63页 |
| ·转MulMIR58拟南芥的筛选与鉴定 | 第57页 |
| ·转基因拟南芥中mul-miR58的表达分析 | 第57-58页 |
| ·转基因拟南芥中mul-miR58前体的Northern blot分析 | 第57-58页 |
| ·转基因拟南芥中mul-miR58成熟体的检测 | 第58页 |
| ·转桑树MulMIR58拟南芥的表型分析 | 第58-59页 |
| ·Mul-miR58对植物耐盐能力的影响 | 第59-60页 |
| ·桑树mul-miR58影响植物对Pst DC3000的抗性 | 第60-63页 |
| ·桑树韧皮部mul-miR58的组织表达特性分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第78页 |
