| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-26页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·L-异亮氨酸的理化性质及应用 | 第10-12页 |
| ·L-异亮氨酸的理化性质 | 第10-11页 |
| ·L-异亮氨酸的应用 | 第11-12页 |
| ·L-异亮氨酸的生产方法及生产概况 | 第12-13页 |
| ·L-异亮氨酸生产方法 | 第12-13页 |
| ·L-异亮氨酸生产概况 | 第13页 |
| ·L-异亮氨酸的生物合成途径及调节机制 | 第13-17页 |
| ·L-异亮氨酸生物合成途径 | 第13-14页 |
| ·L-异亮氨酸生物合成的调节机制 | 第14-17页 |
| ·L-异亮氨酸生产菌的常规育种思路及育种实例 | 第17-20页 |
| ·常规育种思路 | 第17-19页 |
| ·常规诱变育种实例 | 第19-20页 |
| ·代谢工程理论在构建L-异亮氨酸生产菌中的应用 | 第20-22页 |
| ·基于代谢工程理论的L-异亮氨酸工程菌的构建思路 | 第20页 |
| ·分子研究进展 | 第20-22页 |
| ·基于α-酮基丁酸节点处的代谢流研究 | 第22页 |
| ·利用发酵优化提高L-异亮氨酸发酵生产 | 第22-23页 |
| ·论文的立题背景和研究内容 | 第23-26页 |
| ·立题背景 | 第23-24页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第26-32页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-29页 |
| ·主要溶液 | 第29-32页 |
| ·实验方法 | 第32-44页 |
| ·质粒提取 | 第32页 |
| ·基因组小量提取 | 第32-33页 |
| ·DNA限制性内切酶酶切 | 第33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·DNA的回收纯化 | 第34页 |
| ·连接与化转 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞制备及电转化 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·转化子鉴定 | 第37页 |
| ·目的基因测序转化子鉴定 | 第37页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·RT-qPCR实验 | 第38-39页 |
| ·谷氨酸棒杆菌发酵L-异亮氨酸的培养条件及测定方法 | 第39-40页 |
| ·高效液相色谱法定量检测发酵液中的氨基酸浓度 | 第40-41页 |
| ·代谢流量分析 | 第41-44页 |
| 3 结果与讨论 | 第44-71页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌表达载体pXMJ19cimA的构建 | 第44-45页 |
| ·cimA基因的扩增 | 第44页 |
| ·表达载体pXMJ19cimA的构建 | 第44-45页 |
| ·C.glutamicum YILWpXMJ19cimA的构建 | 第45页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌整合载体pK18mobsacBPtac的构建 | 第45-48页 |
| ·tac的扩增 | 第45-46页 |
| ·插入tac序列的同源序列构建 | 第46-47页 |
| ·谷氨酸棒状杆菌整合载体pK18mobsacBPtac的构建 | 第47-48页 |
| ·C.glutamicum YILWPtac的构建 | 第48-51页 |
| ·整合载体pK18mobsacBPtac电转整合C glutamicum YILW | 第48-49页 |
| ·C.glutamicum YILWPtac的筛选 | 第49-51页 |
| ·C.glutamicum YILWPtacpXMJl9cimA的构建 | 第51页 |
| ·cimA编码蛋白的表达和Ptac强启动子的影响 | 第51-54页 |
| ·cimA编码的异源蛋白在C.glutamicum YILWpXMJl9cimA中表达 | 第51-53页 |
| ·Ptac强启动子对C.glutamicum YILWPtac中ilvB转录的影响 | 第53-54页 |
| ·L-异亮氨酸分批发酵研究 | 第54-57页 |
| ·cimA异源表达对C.glutamicum YILWpXMJ19cimA发酵的影响 | 第54-56页 |
| ·启动子Ptac插入对C.glutamicum YILWPtac发酵的影响 | 第56页 |
| ·启动子Ptac插入协同cimA表达对L-异亮氨酸发酵的影响 | 第56页 |
| ·cimA表达与启动子Ptac插入对L-异亮氨酸发酵中副产物的影响 | 第56-57页 |
| ·cimA表达协同启动子Ptac插入对L-异亮氨酸发酵影响的讨论 | 第57-58页 |
| ·5L发酵罐分批发酵研究 | 第58-60页 |
| ·代谢流分布比较 | 第60-62页 |
| ·分批发酵优化 | 第62-70页 |
| ·碳源的优化 | 第63页 |
| ·氮源的优化 | 第63-69页 |
| ·其它营养要素的优化 | 第69页 |
| ·综合多营养策略优化 | 第69-70页 |
| ·发酵优化小结 | 第70-71页 |
| 4 结论 | 第71-72页 |
| 5 展望 | 第72-73页 |
| 6 参考文献 | 第73-79页 |
| 7 研究生期间发表论文情况 | 第79-80页 |
| 8 致谢 | 第80页 |
