| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-27页 |
| ·骨肉瘤及肿瘤转移 | 第14-15页 |
| ·骨肉瘤及小鼠骨肉瘤FBJ细胞 | 第14页 |
| ·肿瘤转移 | 第14-15页 |
| ·神经节苷脂 | 第15-19页 |
| ·神经节苷脂的发现及其结构与生物合成 | 第16-18页 |
| ·分布以及功能 | 第18-19页 |
| ·诱导型一氧化氮合成酶(NOS2) | 第19-21页 |
| ·肝细胞生长因子(HGF) | 第21-23页 |
| ·有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径 | 第23-27页 |
| ·ERK/MAPK途径 | 第24-25页 |
| ·p38 MAPK途径 | 第25页 |
| ·JNK MAPK途径 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-33页 |
| ·细胞系及培养方法 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·RNA提取以及RT-PCR | 第27-29页 |
| ·siRNA | 第29页 |
| ·RNAi by double-stranded siRNA | 第29-30页 |
| ·GD1a,EGF或HGF加药处理 | 第30-31页 |
| ·构建Cav1表达质粒 | 第31页 |
| ·神经节苷脂以及高效薄层板(HPTLC)的展开系统 | 第31页 |
| ·蛋白免疫印记(Western blotting)方法 | 第31-32页 |
| ·免疫沉淀 | 第32-33页 |
| 第三章 神经节苷脂GD1a通过MAPK通路负调控NOS2表达 | 第33-64页 |
| 结果 | 第34-60页 |
| ·多种细胞内信号途径参与NOS2的调控 | 第34-40页 |
| ·Src参与NOS2的调控 | 第34-35页 |
| ·PKC参与NOS2表达的调控 | 第35-36页 |
| ·cAMP依赖性途径参与NOS2表达的调控 | 第36-39页 |
| ·ERK/MAPK途径参与NOS2表达的调控 | 第39-40页 |
| ·PAK1参与调控NOS2的表达 | 第40页 |
| ·GD1a通过MEK2而不是MEK1调控NOS2表达 | 第40-45页 |
| ·在未经处理的FBJ-LL细胞中,是MEK2而不是MEK1参与NOS2表达的调控 | 第40-43页 |
| ·MEK2而不是MEK1阻断GD1a对NOS2的抑制作用 | 第43-44页 |
| ·MEK2而不是MEK1阻断GD1a活化ERK1 | 第44-45页 |
| ·GD1a通过ARAf而不是BRAf或RAF1抑制NOS2的表达 | 第45-48页 |
| ·MRAS参与NOS2表达的调控 | 第48-51页 |
| ·GD1a通过GRB2调控NOS2的表达 | 第51-54页 |
| ·在未经处理的FBJ-LL细胞中,GRB2参与NOS2的调控 | 第51-52页 |
| ·GD1a通过GRB2抑制NOS2的表达 | 第52-54页 |
| ·FBJ-LL细胞中GRB2的沉默阻断了GD1a磷酸化ERK | 第54页 |
| ·未经处理的FBJ-LL细胞中SOS1以及SOS2参与NOS2表达的调控 | 第54-55页 |
| ·SHC不参与GD1a对NOS2的抑制作用 | 第55-58页 |
| ·FBJ-LL细胞中P90RSK不是ERK1的下游信号分子 | 第58页 |
| ·NCK参与调控NOS2表达 | 第58-60页 |
| 讨论 | 第60-63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 表皮生长因子(EGF)通过MAPK通路调控NOS2的表达 | 第64-78页 |
| 结果 | 第66-75页 |
| ·FBJ-LL细胞中,外源性EGF抑制NOS2的表达 | 第66页 |
| ·EGF通过EGFR磷酸化ERK1/2 | 第66-68页 |
| ·EGF通过MEK2而不是MEK1抑制NOS2表达 | 第68-70页 |
| ·MEK2而不是MEK1参与EGF对NOS2的调控 | 第68-69页 |
| ·MEK2而不是MEK1阻断EGF磷酸化ERK1/2 | 第69-70页 |
| ·EGF通过GRB2调控NOS2的表达 | 第70-71页 |
| ·EGF通过激活EGFR抑制NOS2的表达 | 第71-72页 |
| ·EGF促进EGFR募集GRB2 | 第72-73页 |
| ·EGF未促进EGFR募集SHC1以及SHC2 | 第73-75页 |
| 讨论 | 第75-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 表皮生长因子受体EGFR不参与GD1a的信号调控 | 第78-89页 |
| 结果 | 第79-86页 |
| ·在未经处理的FBJ-LL细胞中EGFR抑制NOS2的表达 | 第79-80页 |
| ·EGFR不参与GD1a抑制NOS2表达的调控 | 第80-86页 |
| ·FBJ-LL细胞中GD1a不能活化EGFR | 第80-81页 |
| ·沉默EGFR并未阻断GD1a对NOS2的抑制作用 | 第81-82页 |
| ·抑制EGFR活性不能阻断GD1a抑制NOS2表达 | 第82-83页 |
| ·沉默EGFR未阻断GD1a活化ERK1/2 | 第83-84页 |
| ·GD1a不能诱导EGFR募集GRB2 | 第84-86页 |
| 讨论 | 第86-88页 |
| 小结 | 第88-89页 |
| 第六章 GDla通过Cav1抑制HGF受体MET磷酸化而负调控HGF的表达 | 第89-108页 |
| 结果 | 第90-105页 |
| ·GD1a抑制HGF的表达 | 第90-93页 |
| ·在FBJ细胞中HGF的表达与GD1a含量负相关 | 第90-92页 |
| ·向FBJ-LL细胞中外源性加入GD1a可抑制HGF的表达 | 第92-93页 |
| ·HGF自分泌环(autocrine loop)存在于FBJ细胞中 | 第93-95页 |
| ·GD1a通过HGF受体MET抑制HGF表达 | 第95-97页 |
| ·Cav1负调控HGF的表达 | 第97-100页 |
| ·Cav1抑制HGF诱导的MET磷酸化 | 第100-102页 |
| ·FBJ-LL细胞中ERK1而不是ERK2参与HGF的表达的调控 | 第102-103页 |
| ·Akt通路参与HGF的调控 | 第103-105页 |
| 讨论 | 第105-107页 |
| 小结 | 第107-108页 |
| 全文结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 发表文章 | 第121-122页 |
| 英文缩写 | 第122-124页 |
| 附录 | 第124-133页 |
