| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-13页 |
| 绪论 | 第13-27页 |
| 1 群体感应及其类型 | 第13页 |
| 2 aiiA基因和AiiA蛋白 | 第13-15页 |
| 3 启动子 | 第15-20页 |
| ·启动子的概念 | 第15-16页 |
| ·启动子的分类 | 第16页 |
| ·启动子的结构 | 第16-20页 |
| ·原核生物启动子的结构 | 第16-19页 |
| ·真核生物启动子的结构 | 第19-20页 |
| 4 启动子的克隆方法 | 第20-24页 |
| ·利用启动子探针载体筛选启动子 | 第21页 |
| ·利用PCR技术克隆启动子 | 第21-24页 |
| 5 启动子的研究方法 | 第24-26页 |
| ·片段缺失转化分析 | 第24-25页 |
| ·突变分析 | 第25页 |
| ·功能获得性实验 | 第25-26页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第一章 苏云金芽胞杆菌aiiA基因5’端侧翼序列的克隆和分析 | 第27-41页 |
| 第一节 前言 | 第27页 |
| 第二节 材料和方法 | 第27-32页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株和质粒 | 第27-28页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第28页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列引物的设计 | 第29页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒DNA的制备 | 第29-30页 |
| ·aiiA基因5’端侧翼序列克隆的PCR反应体系 | 第30页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第30-31页 |
| ·连接体系 | 第31页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆子pMD18T-αP_(_1930~-+200)的筛选和验证 | 第32页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列的测序及分析 | 第32页 |
| 第三节 结果与分析 | 第32-39页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列的克隆 | 第32-33页 |
| ·阳性克隆子pMD18T-αP_(_1930~-+200)的筛选 | 第33-34页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列的测序 | 第34-37页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列的生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第二章 苏云金芽胞杆菌aiiA基因5'端侧翼序列的分段克隆 | 第41-49页 |
| 第一节 前言 | 第41页 |
| 第二节 材料和方法 | 第41-45页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-42页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第42页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第42页 |
| ·主要仪器与设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·引物的设计 | 第42-43页 |
| ·pMD18T-αP_(_1930~-+200)质粒的制备 | 第43-44页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列的分段克隆 | 第44页 |
| ·aiiA基因5’端侧翼缺失片段αP_(-x)与pMD18-T载体连接 | 第44页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·缺失片段克隆载体pMD18-T-αP_(-x)转化DH5α感受态细胞 | 第45页 |
| ·阳性克隆子的筛选和验证 | 第45页 |
| 第三节 结果与分析 | 第45-47页 |
| ·aiiA基因5'端侧翼序列的分段克隆 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆子的筛选和验证 | 第46-47页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 苏云金芽胞杆菌aiiA基因5'端侧翼序列启动子的功能验证 | 第49-69页 |
| 第一节 前言 | 第49页 |
| 第二节 材料和方法 | 第49-56页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第49-50页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第50页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第50页 |
| ·主要仪器与设备 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-56页 |
| ·模板质粒pET28a-GFP的提取 | 第50页 |
| ·绿色荧光蛋白本底表达载体pET28a-dp-GFP的构建 | 第50-51页 |
| ·侧翼序列功能鉴定载体pET28a-αP_x-GFP的构建 | 第51-54页 |
| ·侧翼序列功能鉴定载体pET28a-αP_x-GFP的筛选和验证 | 第54-55页 |
| ·aiiA基因5’端侧翼序列的功能鉴定 | 第55-56页 |
| ·细胞荧光显微镜观察 | 第55页 |
| ·荧光分光光度计(OLYMPUS F-4600)绿色荧光蛋白激发光波长(Ex)和发射光波长(Em)的扫描确定 | 第55页 |
| ·荧光分光光度计(OLYMPUS F-4600)的定量测定 | 第55-56页 |
| 第三节 结果与分析 | 第56-67页 |
| ·绿色荧光蛋白报告基因载体pET28a-GFP的酶切验证 | 第56页 |
| ·绿色荧光蛋白本底表达载体pET28a-dP-GFP的构建 | 第56-58页 |
| ·侧翼序列功能鉴定载体pET28a-αP_(_x)-GFP的筛选和验证 | 第58-59页 |
| ·侧翼序列功能鉴定载体pET28a-αP_(_26~--1)-GFP、pET28a-αP_(-35~--1)-GFP和pET28a-αP_(_50~--1)-GFP的筛选和验证 | 第59-61页 |
| ·荧光显微镜分析aiiA基因5'端侧翼序列的启动子功能 | 第61-63页 |
| ·绿色荧光蛋白激发光波长(Ex)和发射光波长(Em)的扫描确定 | 第63-65页 |
| ·荧光分光光度计的定量测定 | 第65-67页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 苏云金芽胞杆菌aiiA基因启动子的突变分析 | 第69-79页 |
| 第一节 前言 | 第69页 |
| 第二节 材料与方法 | 第69-72页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·菌株和质粒 | 第69页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第69页 |
| ·主要培养基及试剂配制 | 第69页 |
| ·主要仪器与设备 | 第69-70页 |
| ·实验方法 | 第70-72页 |
| ·引物设计(图4-1) | 第70-71页 |
| ·模板质粒pET28a-αP_(_295~-_101)-GFP的提取 | 第71页 |
| ·aiiA基因启动子定点突变PCR的条件 | 第71页 |
| ·突变质粒的转化和验证 | 第71-72页 |
| ·突变菌株的功能验证 | 第72页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第72页 |
| ·荧光分光光度计(OLYMPUS F-4600)的定量测定 | 第72页 |
| 第三节 结果与分析 | 第72-77页 |
| ·苏云金芽胞杆菌aiiA基因启动子的点突变和缺失突变 | 第72-73页 |
| ·突变质粒的转化和验证 | 第73页 |
| ·突变质粒的测序分析 | 第73-74页 |
| ·突变质粒细胞荧光显微镜的观察 | 第74-76页 |
| ·荧光分光光度计的定量测定 | 第76-77页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 个人简历 | 第93-97页 |
