| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略表 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-17页 |
| 1 研究背景、目的及意义 | 第12-14页 |
| ·研究背景 | 第12-13页 |
| ·研究目的及意义 | 第13-14页 |
| 2 NonO蛋白的研究现状 | 第14-15页 |
| ·NonO蛋白的发现 | 第14页 |
| ·NonO蛋白亚细胞定位与功能 | 第14-15页 |
| 3 PBDC1和UPF0538的研究现状 | 第15页 |
| 4 技术路线 | 第15-17页 |
| 第二章 PBDC1和NonO蛋白在红系分化过程中的的功能研究 | 第17-57页 |
| 1 前言 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-39页 |
| ·材料、试剂及实验仪器 | 第18-22页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·主要试剂配制 | 第20-22页 |
| ·实验方法 | 第22-39页 |
| ·Westernblot检测PBDC1在MEL细胞分化中的表达情况 | 第22-23页 |
| ·Westernblot检测PBDC1在小鼠胎肝E11.5~E15.5 的表达情况 | 第23页 |
| ·免疫细胞化学实验检测PBDC1在MEL细胞的亚细胞定位 | 第23-24页 |
| ·免疫细胞化学实验检测PBDC1在小鼠胎肝细胞中的定位 | 第24页 |
| ·细胞培养 | 第24页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·RNA的反转录 | 第25页 |
| ·PBDC1 基因的引物设计 | 第25页 |
| ·PBDC1 基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·表达载体pGEX-4T1PBDC1的构建 | 第26-30页 |
| ·PBDC1融合蛋白的表达 | 第30-31页 |
| ·GST-Pull Down实验鉴定PBDC1的相互作用蛋白 | 第31-33页 |
| ·干扰载体pLKO.1-NonO-shRNA的构建 | 第33-37页 |
| ·慢病毒的包装 | 第37-38页 |
| ·低表达NonO的MEL细胞稳定株的建立 | 第38页 |
| ·Westernblot验证低表达NonO的MEL细胞稳定株 | 第38-39页 |
| ·Westernblot验证低表达NonO对红系相关蛋白表达的影响 | 第39页 |
| ·MTT比色法检测低表达NonO对MEL细胞活力的影响 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-55页 |
| ·PBDC1在 红系分化中的表达变化 | 第39-40页 |
| ·PBDC1 在丁酸钠诱导MEL细胞分化中的表达情况 | 第39-40页 |
| ·PBDC1 在E11.5~E15.5小鼠胎肝的表达情况 | 第40页 |
| ·PBDC1的细胞定位 | 第40-42页 |
| ·PBDC1在MEL细胞中的定位 | 第40-41页 |
| ·PBDC1在小鼠胎肝细胞中的定位 | 第41-42页 |
| ·表达载体pGEX-4T1P BDC1的构建 | 第42-44页 |
| ·PCR扩增PBDC1基因 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pGEX-4T1PBDC1的鉴定 | 第43-44页 |
| ·PBDC融合蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·GST-Pull Down鉴定PBDC1相互作用蛋白与验证及生物信息学分析 | 第45-52页 |
| ·PBDC1 相互作用蛋白的鉴定 | 第45-50页 |
| ·GST-Pull Down结果验证 | 第50-51页 |
| ·PBDC1 相互作用蛋白生物信息学分析 | 第51-52页 |
| ·干扰载体pLKO.1-NonO-shRNA的鉴定 | 第52-53页 |
| ·干扰载体pLKO.1-NonO-shRNA的酶切鉴定 | 第52页 |
| ·干扰载体pLKO.1-NonO-shRNA的测序鉴定 | 第52-53页 |
| ·病毒包装时转染效率的检测 | 第53页 |
| ·低表达NonO的MEL细胞稳定株的筛选及鉴定 | 第53-54页 |
| ·低表达NonO对MEL细胞活力的影响 | 第54-55页 |
| ·低表达NonO对红系相关基因表达的影响 | 第55页 |
| ·低表达NonO对丁酸钠诱导MEL细胞分化的影响 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第三章 UPF0538蛋白的抗体制备 | 第57-69页 |
| 1 前言 | 第57页 |
| 2 材料与方法 | 第57-65页 |
| ·实验材料、试剂及仪器 | 第57-59页 |
| ·菌株及质粒 | 第57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57-58页 |
| ·仪器 | 第58-59页 |
| ·主要试剂的配制 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-65页 |
| ·重组pET-28a(+)-UPF0538质粒的构建 | 第59-62页 |
| ·重组pET-28a(+)-UPF0538质粒的鉴定 | 第62-63页 |
| ·UPF0538蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第63-64页 |
| ·UPF0538多克隆抗体的制备、纯化及鉴定 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-68页 |
| ·PCR扩增UPF0538基因 | 第65页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-UPF0538的鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-UPF0538的酶切鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-UPF0538的测序鉴定 | 第66页 |
| ·UPF0538蛋白的表达及可溶性分析 | 第66-67页 |
| ·UPF0538蛋白的纯化及鉴定 | 第67-68页 |
| ·UPF0538多克隆抗体的Western blot检测 | 第68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 第四章 结论和展望 | 第69-70页 |
| 1 结论 | 第69页 |
| 2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第75页 |
